ICS 67.040 C 53 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 5009.1922003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定 Determination of 4-amino-3,5-dichloro-α (tert-butylamino) methyl-benzyl alcohol (clenbuterol) residues in animal foods 2004-01-01实施 2003-08-11发布 中华人民共和国卫生部 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 5009.192—2003 前言 本标准修改采用了EUR15127-EN《兽药残留，动物性食品及制品一参考物质和分析方法，2nc 英文第二版）。 本标准与欧盟《动物性食品中兽药残留的测定方法》Sg2.1、Sg2.3.Sg2.4和Cy2.3不同之处为： Sg2.1、Sg2.3,Sg2.4和Cy2.3为动物性食品中β-兴奋剂的多组分残留检测方法。 Sg2.1为牛尿液中β-兴奋剂的GC-MS筛选方法，Sg2.3为牛尿液中β-兴奋剂的ELISA筛选 方法，Sg2.4为牛肝、肾和肉中β-兴奋剂的GC-MS筛选方法，Cy2.3为牛尿液中β-兴奋剂的 GC-MS确证方法。本标准则提出从酶联免疫法（ELISA）筛选、高效液相色谱法（HPLC)定量 到气质联机法（GC-MS)确证和定量的一套方法，以满足我国动物性食品中克伦特罗残留监控 的需要。 本标准中酶联免疫法（ELISA）筛选和气质联机法（GC-MS）的测定原理、操作过程和要求、主 要技术参数及检测灵敏度与欧盟方法一致。本标准中的高效液相色谱法（HPLC)是根据实验 资料及验证结果提出的。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位：中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所、中国肉类食品综合研究中心、北京 市疾病预防控制中心。 本标准主要起草人：吴永宁、苗虹、赵云峰、赵京玲、赵榕、吴国华、王凌琰 1 GB/T5009.192—2003 引言 克伦特罗，为强效选择性β2-受体激动剂，有强而持久的松弛支气管平滑肌的作用，用于治疗哮喘。 克伦特罗可促进动物生长，改善动物体内脂肪分配，并增加瘦肉率。20世纪90年代，我国错误地将其 作为科研成果开始以饲料添加剂引人并推广，被俗称为“瘦肉精”。一连串因食用含克伦特罗的食物而 引起的中毒事件发生后，使克伦特罗成了世界上普遍禁用的饲料添加剂。1997年以来，我国有关行政 部门多次明令禁止畜牧行业生产、销售和使用盐酸克伦特罗。但我国各地克伦特罗中毒事件仍然频繁 发生，说明非法使用克伦特罗现象依然存在。为了对畜禽产品中的克伦特罗开展监测，加强市场监督检 验力度，预防中毒事件的发生，必须建立有效的检测方法。 我国在这方面的检测工作起步较晚，伴随着国际和国内对克伦特罗的禁用和监控要求，迫切需要发 展适合我国国情的从筛选到确证的一套检测方法。为此，本标准提出了从酶联免疫法（ELISA）筛选、高 效液相色谱法（HPLC)定量到气质联机法（GC-MS)确证和定量这一套方法来满足我国动物性食品中克 伦特罗残留监控的需要。 GB/T5009.192—2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定 1 范围 本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。 本标准适用于新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。 本标准也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定、 本方法检出限：第一法气相色谱-质谱法为0.5μg/kg；第二法高效液相色谱法为0.5uμg/kg；第三 色谱法为0.5ng~4ng；第三法酶联免疫法为0.004ng~0.054ng。 第一法气相色谱-质谱法（GC-MS) 2原理 固体试样剪碎，用高氯酸溶液匀浆。液体试样加人高氯酸溶液，进行超声加热提取，用异丙醇十乙 酸乙酯（40十60）萃取，有机相浓缩，经弱阳离子交换柱进行分离，用乙醇十浓氨水（98十2）溶液洗脱，洗 脱液浓缩，经N，O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）衍生后于气质联用仪上进行测定。以美托洛尔 为内标，定量。 3试剂 3.1克伦特罗（clenbuterolhydrochloride），纯度≥99.5%。 3.2 美托洛尔（metoprolol），纯度≥99%。 3.3 磷酸二氢钠。 3.4 氢氧化钠。 3.5 氯化钠。 3.6高氯酸。 3.7 浓氨水。 3.8 异丙醇。 3. 9 乙酸乙酯。 3. 10 甲醇：HPLC级。 3. 11 甲苯：色谱纯。 3.12 乙醇。 3. 13 衍生剂：N,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）。 3. 14 高氯酸溶液（0.1mol/L)。 3. 15 氢氧化钠溶液(1 mol/L)。 3.16 磷酸二氢钠缓冲液（0.1mol/L，pH=6.0)。 3. 17 异丙醇十乙酸乙酯（40十60）。 3. 18 乙醇十浓氨水（98十2）。 3. 19 美托洛尔内标标准溶液：准确称取美托洛尔标准品，用甲醇溶解配成浓度为240mg/L的内标储 备液，贮于冰箱中，使用时用甲醇稀释成2.4mg/L的内标使用液。 3.20 ）克伦特罗标准溶液：准确称取克伦特罗标准品，用甲醇溶解配成浓度为250mg/L的标准储备 液，贮于冰箱中，使用时用甲醇稀释成0.5mg/L的克伦特罗标准使用液。 1