ICS 07.080 A 21 中华人民共和国国家标准 GB/T 34223—2017 核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度 检测方法 Determination of the purity of ribonuclease and desoxyribonuclease 2018-04-01实施 2017-09-07发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T34223—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：中国标准化研究院、厦门市格灵生物技术有限公司、中国生物技术发展中心、浙江 工商大学、河北农业大学、合肥工业大学、河北省出人境检验检疫局、泉州市标准化研究所、北京市食品 科学研究院、河北食品检验研究院、东营市标准化信息所、河南大学。 本标准主要起草人：马爱进、陈智勇、苏月、王彦波、孙纪录、郑磊、刘道亮、林清山、孙勇、云振宇、 傅玲琳、吴琦、赵琳、周魏、刘鹏、康文艺、宗学花 GB/T34223—2017 核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度 检测方法 1范围 本标准规定了核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测原理、仪器设备及器具、主要试剂、分析步骤 和结果分析。 本标准适用于生化试剂核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶产品的生产和检测 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SN/T3926出口乳、蛋、豆类食品中蛋白质含量的测定考马斯亮蓝法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 核糖核酸酶 ribonuclease;RNase 水解核糖核酸(RNA)中磷酸二酯键，生成寡核苷酸或单核苷酸的核酸酶 3.2 脱氧核糖核酸酶 deoxyribonuclease;DNase 水解脱氧核糖核酸(DNA)中磷酸二酯键，生成寡核苷酸或单核苷酸的核酸酶。 4 原理 定浓度的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE)可分离分子质量不同的蛋白质，经 考马斯亮蓝（CBB）染色，脱色成像后，通过计算进行核酸酶的纯度检测。 5仪器设备及器具 3 5.1电泳系统 5.2凝胶扫描装置。 5.3水平脱色摇床，转速45r/min。 5.4电子天平：精度为0.0001g、0.01g和0.1g。 6 主要试剂 本方法所用试剂均为分析纯，实验用水均为GB/T6882规定的二级水。 1 GB/T34223—2017 取丙烯酰胺29.0g，N，N-甲叉双丙烯酰胺1.0g，加入60mL水，充分搅拌溶解，定容到100mL。 重新配制备用。 取12.12g三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶于80mL的水中，充分搅拌溶解，用HCl调pH值为6.8,定 容至100mL，室温保存备用。 6.31.5mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液（Tris-HCI)·pH8.8 取18.17g三羟甲基氨基甲烷溶于80mL的水中，充分搅拌溶解，用HCI调pH值为8.8,定容至 100mL，室温保存备用。 6.410%十二烷基磺酸钠（SDS）溶液 取10.0g十二烷基磺酸钠充分溶于约80mL的水中，定容至100mL，室温保存备用。 6.510%过硫酸铵（APS）溶液 取0.1g过硫酸铵于1.5mL离心管，加1mL水溶解，现配现用， 6.610倍Tris-甘氨酸电极缓冲液 取30gTris、144g甘氨酸、10gSDS溶于800mL水中，定容至1L，室温保存，使用时稀释10倍。 6.75倍十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE)加样缓冲液 取1.25mL1.0mol/LTris-HClpH6.8）、SDS0.50g、2.5mL甘油、0.025g溴酚蓝，用水溶解定容 至5mL，按照每管500uL分装后，4℃保存备用。临用前每管加0.078g二硫苏糖醇（DTT），充分溶 解，现配现用。 6.8染色液 染色液A：考马斯亮蓝G-2500.1g95%乙醇50mL、85%磷酸100mL用水定容至1000mL，保 存备用。 染色液B：考马斯亮蓝R-2500.5g、冰乙酸25mL、乙醇250mL，用水定容至500mL，室温保存。 6.9脱色液 取100mL冰乙酸、400mL甲醇，用水定容至1L，室温保存。 6.10标准蛋白质 分子质量为6.5kDa~66.4kDa或分子质量为6.5kDa～200kDa。 6.111.0mg/mL牛血清白蛋白标准溶液 取0.01g纯度≥98%的牛血清白蛋白，精确至0.0001g，溶于10mL浓度为0.15mol/L的NaCl 溶液中。 2