ICS 07.080 G 66 中华人民共和国国家标准 GB/T 34794—2017 琼脂糖凝胶回收试剂盒测定通则 Guidelines for DNA gel purification kit 2018-05-01实施 2017-11-01发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 34794—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387)提出并归口。 限公司、四川中测生物科技有限公司。 本标准主要起草人：周李华、史谢飞、马丽侠、唐小波、侯晓妮、王智、李怀平、叶德萍、孙登峰、 谭和平。 GB/T 34794—2017 琼脂糖凝胶回收试剂盒测定通则 1范围 本标准规定了柱式琼脂糖凝胶回收试剂盒的DNA回收产物评估指标及测试方法。 本标准适用于柱式琼脂糖凝胶回收试剂盒的测定。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T11165实验室pH计 GB/T26813双光束紫外可见分光光度计 JJG646移液器检定规程 YY/T0087电泳装置 YY/T0657 医用离心机 3术语和定义 3 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 DNA纯化 DNApurification 采用适当方法降低可以观察到的或可测量到的连接、酶切、标记、扩增等抑制物的过程，为获得更高 纯度DNA。 3.2 DNA回收率DNA recovery rate 即DNA回收得率，DNA目的片段回收后与回收前的产量百分比 3.3 最大上样量 column reservoir capacity 单个吸附柱的单次最大上样体积。 3.4 吸附柱的承载量 binding capacity 单个吸附柱每次最多可吸附DNA的量。其决定了单次回收的DNA最大量。 4原理 介质吸附法是一种常用的纯化核酸的方法。柱式回收试剂盒是将硅胶膜或其他吸附介质固定在离 心柱上作为吸附剂，在高盐（如3.0mol/L~5.0mol/L盐酸胍）低pH(5.0mol/L~6.5mol/L）状态下， 1 GB/T34794—2017 吸附柱专一性地吸附DNA；而在低盐（TE或者2.5mmol/LTris-HCI)或水溶液状态下,DNA被洗脱 下来。 5仪器和设备 5.1离心机：转速10000r/min以上，应符合YY/T0657的要求。 5.2水浴锅或金属浴：温度范围60℃~70℃。 5.3电泳系统，应符合YY/T0087的要求。 5.4凝胶成像系统。 5.5可调移液器：0.5μL~10μL、10μL~100μL100μL~1000μL0.5mL~5mL，应符合JJG646 的要求。 5.6紫外分光光度计，应符合GB/T26813的要求。 5.7pH计，应符合GB/T11165的要求。 5.8天平：精度为0.1mg。 5.9 刀片。 6试剂 除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水。所有试剂溶液（含水 溶液）宜大体积配制、小体积分装经高压灭菌后使用，不宜高压灭菌的试剂应用0.22um膜过滤除菌；酶 溶液应避免反复冻融。 6.1三羟甲基氨基甲烷（Tris）。 6.2盐酸（Hydrochloric acid,HCI)。 6.3氢氧化钠（Sodiumhydroxide，NaOH)。 6.4乙酸钠（sodiumacetate，NaAc）溶液：3mol/L，用乙酸调pH至5.2,0.22μm膜过滤 6.5乙二胺四乙酸二钠(ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt,Na,EDTA，CiHN2O.Naz)。 6.6无水乙醇（alcohol,CzH，OH)，4℃保存及使用。 6.7I 琼脂糖（Agarose，AG）。 6.8 核酸染剂（如GoldView等染料）。 6.9上样缓冲液（Loadingbuffer)。 6.10DNA标准品（Hind Ⅲ酶切的^DNA产物）。 6.11100倍电泳缓冲液溶液（TAE）：4mol/LTris-HCl（pH8.0），2mol/L醋酸钠，200mmol/L EDTA。使用时稀释100倍。 6.12TE缓冲液(pH8.0):10mmol/LTris-Cl,1mmol/LEDTA,使用HCl或NaOH调节pH,4℃ 保存备用。 7试验方法 7.1标准DNA溶液的配制 将不同的DNAFragment（10bp～20000bp）用TE缓冲液分别配制成1μg/uL的DNA标准溶 液备用。 2