ICS 71. 100.70 Y 42 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T29659—2013 化妆品中丙烯酰胺的测定 Determination acrylamide in cosmetics 2013-09-06发布 2014-02-15实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T29659—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。 本标准起草单位：上海市日用化学工业研究所、广州市产品质量监督检验院、上海香料研究所。 本标准主要起草人： 第一法：武晓剑、李琼、沈敏、康薇； 第二法：洗燕萍、陈意光、罗东辉、罗海英、郭新东、吴玉銮。 I GB/T29659—2013 化妆品中丙烯酰胺的测定 1范围 本标准规定了化妆品中丙烯酰胺的液相色谱和液相色谱-质谱/质谱测定方法， 本标准适用于膏霜、乳液、化妆水等皮肤护理类化妆品中内烯酰胺的测定。 本标准高效液相色谱-二极管阵列检测器法对丙烯酰胺的检出限为30μg/kg，定量限为90μg/kg； 高效液相色谱-质谱/质谱法对丙烯酰胺的检出限为5uμg/kg，定量限为15μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3第一法高效液相色谱-二极管阵列检测器法 3.1原理 试样用水和甲醇的混合提取剂超声提取，过滤后，经配有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪检 测，外标法定量。 3.2试剂和材料 除非另有规定，所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682规定的一级水。 3.2.1甲醇：色谱纯。 3.2.2丙烯酰胺标准物质：CAS号79-06-1，相对分子质量71，纯度不小于99.0%，结构式： 0 “H. 3.2.3丙烯酰胺标准储备液：准确称取100mg（精确到0.1mg）标准品（3.2.2）于100mL容量瓶中， 用甲醇溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL的标准储备液，于4℃避光保存。 3.3仪器和设备 3.3.1高效液相色谱仪（HPLC)：配有二极管阵列检测器(DAD)。 3.3.2分析天平：感量分别为0.0001g和0.01g。 3.3.3超声波清洗仪。 3.3.4离心机：大于5000r/min。 3. 3. 6 0.22um微孔滤膜（避免使用尼龙材质）。 1 GB/T29659—2013 3.4分析步骤 3.4.1样品预处理 称取1.0g（精确至0.01g）试样于10mL比色管中，加人水-甲醇（95：5，体积分数）至刻度，超声 提取20min后，离心机（3.3.4)离心20min，经0.22μm微孔滤膜过滤，以待进样。 3. 4. 2 高效液相色谱仪条件 高效液相色测定的参考条件如下： 色谱柱：AQ-Cis柱，i.d.5μm，250mm×4.6mm（内径），或相当者； 流动相：水：甲醇一95：5（体积分数），等度洗脱； c) 流速：0.5mL/min; 柱温：40℃； e) 检测波长：210nm； f）进样量：20μL。 3.4.3 校准曲线的绘制 100mL，浓度分别为0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL。取校准曲线各浓 度溶液注入高效液相色谱仪，以峰面积与校准浓度绘制校准曲线。丙烯酰胺标准溶液色谱图见附录A。 3.4.4样品测定 取样品溶液（3.4.1)注人高效液相色谱仪，根据峰的保留时间和紫外光谱图定性。记录色谱峰面 积，从校准曲线上获得对应的丙烯酰胺质量浓度 3.4.5定性确认 液相色谱仪对样品进行定性测定，进行样品测定时，如果检出的丙烯酰胺的色谱峰的保留时间与标 准物质一致，并且在扣除背景后的样品色谱图，该物质的紫外吸收图谱与标准物质的紫外吸收图谱相一 致，则可初步确认存在丙烯酰胺。必要时，阳性样品需要“第二法液相色谱-质谱/质谱法”进行确认。 3.4.6空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 3.4.7平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定 3.5结果计算 试样中丙烯酰胺的含量由色谱数据处理器或按式（1）计算： X-CXV :(1) m 式中： X——试样中丙烯酰胺的含量，单位为微克每克（ug/g）； C——校准曲线查出测试溶液中丙烯酰胺的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V—试样定容体积，单位为毫升（mL）； 2 GB/T29659—2013 m——试样的质量，单位为克（g）。 3.6回收率和精密度 3.7允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 4第二法高效液相色谱-质谱/质谱法 4.1原理 试样用丙酮超声提取，氮吹浓缩，以水溶解残渣，经C1：固相萃取柱净化，净化液用高效液相色谱-质 谱/质谱测定，内标法定量。 4.2试剂和材料 除非另有规定，所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682规定的一级水。 4.2.1乙睛：色谱纯。 4.2.2甲醇：色谱纯。 4.2.3丙酮：分析纯。 4.2.4乙酸：色谱纯。 4.2.50.3%乙酸溶液：准确量取3mL乙酸（4.2.4）于1L容量瓶中，用水定容，混匀。过0.45μm滤 膜（4.3.8）备用。 4.2.6Cls固相萃取小柱：3cm/500mg；使用前依次以3mL甲醇和3mL水活化。 4.2.7内烯酰胺标准物质：同3.2.2。 4.2.8丙烯酰胺同位素内标（1,2,3-13C)：纯度不小于99.0%。 4.2.9丙烯酰胺标准储备液：准确称取100mg（精确到0.1mg）标准品（4.2.7）于100mL容量瓶中， 用水溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL的标准储备液，于4℃避光保存。 4.2.10丙烯酰胺同位素内标储备液：准确称取5mg（精确到0.1mg）内标标准品（4.2.8）于100mL 容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，配制成浓度为50ug/mL的内标储备液，于4℃避光保存。 4.2.11丙烯酰胺同位素内标使用液：以水稀释丙烯酰胺同位素内标储备液（4.2.10）至浓度为 500 μg/L. 4.2.12基质溶液：称取阴性样品按步骤（4.4.1)处理后得到的溶液。 4.3仪器和设备 4.3.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪（HPLC-MS/MS）：配有电喷雾离子源（ESI）。 4.3.23 分析天平：感量为0.0001g和0.01g。 4. 3. 3 离心机：转速不低于4000r/min。 4.3.4超声波清洗仪。 4.3.5 固相萃取装置。 4.3.6水浴恒温氮气吹干仪 4. 3.7 涡旋混合器。 4.3.80.45μm微孔滤膜（避免使用尼龙材质）。 3