文库搜索
切换导航
文件分类
频道
联系我们
国家标准目录
国际ISO标准目录
行业标准目录
地方标准目录
文件分类
联系我们
国家标准目录
国际ISO标准目录
行业标准目录
地方标准目录
批量下载
ICS 07.080 CCS A 21 中华人民共和国国家标准 GB/T 38485—2021 微生物痕量基因残留测定 微滴数字PCR法 Determination for trace gene residues of microorganisms- Microdroplet digital PCR 2022-07-01实施 2021-12-31发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T38485—2021 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任, 本文件由中国标准化研究院提出并归口。 究院 1 GB/T 38485—2021 微生物痕量基因残留测定 微滴数字PCR法 1范围 本文件规定了用微滴数字PCR法测定微生物痕量基因残留(100pg/mL以下)的方法。 本文件适用于加工产品中酿酒酵母和植物乳杆菌痕量特征基因残留(100pg/mL以下)的测定 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 痕量基因残留 trace gene residue 微生物加工产品在后续分离纯化中很难去除的痕量(含量在100Pg/mL以下)核酸。 4原理 利用液滴微流控技术,将待测生物样品所残留的目标核酸PCR扩增体系分割成几十份到几万份包 含一个拷贝的核酸分子微升级油包水微滴。按照常规PCR体系对其进行扩增,通过荧光探针实现信号 读出。所产生微滴阳性信号的数目即代表了原始样本中目标核酸分子的拷贝数,从而直接数出目标核 酸分子的个数,对起始样品的痕量基因残留进行定量。 5 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 5.1水为GB/T6682规定的一级水。将一级水在121℃下高压加热灭菌15min制备得到无菌水。 5.2DNA提取试剂盒。 5.3微滴数字PCR反应试剂盒。 5.4引物和探针 5.4.1酿酒酵母引物和探针: SC-F:5'-GGACTCTGGACATGCAAGAT-3'; SC-R:5'-ATACCCTTCTTAACACCTGG-3'; SC-P:5'-FAM-CCCTTCAGAGCGTTTTCTCTAAATTGATAC-BHQ1-3'。 1 GB/T38485—2021 5.4.2植物乳杆菌引物和探针: Lp-F:5'-TTACATTTGAGTGAGTGGCGAACT-3'; Lp-R:5'-AGGTGTTATCCCCCGCTTCT-3' Lp-P:5'-FAM-CAGGTTWCCCACGTGTTACTCAC-BHQ1-3。 5.5酵母浸出粉陈葡萄糖培养基(YPD培养基):称取蛋白陈20.0g,酵母提取物10.0g,葡萄糖20.0g, 热灭菌15min。 5.6乳酸细菌培养基(MRS培养基):称取蛋白陈10.0g,牛肉粉10.0g,酵母粉5.0g,葡萄糖20.0g,柠 檬酸三铵2.0g,乙酸钠5.0g,磷酸氢二钾2.0g,硫酸镁0.2g,硫酸锰0.05g,加人吐温-801.0mL,先加 人990mL水溶解,并调节pH至6.2~6.6的范围内,再定容至1000mL。然后在121℃下高压加热 灭菌15min。 液。取种子液0.5mL转接于10mLYPD液体培养基中,在恒温震荡摇床中以30℃土1℃和 180r/min的条件培养至OD600为0.3~0.4(约2h~~3h),得到酿酒酵母ATCC204508纯培养物 5.8植物乳杆菌CGMCC1.2437纯培养物:挑取活化平板中植物乳杆菌CGMCC1.2437的单菌落 接种至25mLMRS液体培养基中,在恒温震荡摇床中以30℃土1℃和180r/min的条件培养过夜 得到种子液。取种子液0.5mL转接于10mLMRS液体培养基中,在恒温震荡摇床中以30℃士 1℃和180r/min的条件培养至OD6为0.3~0.4(约2h~3h),得到植物乳杆菌CGMCC1.2437纯 培养物。 6仪器设备 6.1微滴数字PCR仪。 6.2核酸定量仪。 6.3热循环仪。 6.4电子天平:精度0.01g。 6.5移液器:量程0.1μL~2.5μL,2μL~20μL,10μ~100μ和100μL~1000μL。 6.6 恒温震荡摇床:温度可实现(28±1)℃和(37土1)℃,转速在125r/min~250r/min。 6.7F pH计:精度0.1。 6.8 紫外-可见光分光光度计:可检测波长包含(600士20)nm,配备1cm比色皿。 7反应体系准备 7.1酿酒酵母残留基因检测反应体系的准备 7.1.1受试样品DNA模板准备 取1.00g受试样品,按照核酸提取试剂盒说明书进行DNA提取操作,最后使用50uL的无菌进行 DNA洗脱。提取得到的DNA样品使用核酸定量仪检测核酸的浓度和纯度 7.1.2阳性对照DNA模板准备 取植物乳杆菌纯培养物(5.8)100μL,用无菌水稀释至OD60a为0.2(此时菌体浓度约为2×108 CFU/mL)。采用梯度稀释的方法,继续用无菌水稀释至菌体浓度为1X10"CFU/mL。取100μL稀释
GB-T 38485-2021 微生物痕量基因残留测定 微滴数字PCR法
文档预览
中文文档
7 页
50 下载
1000 浏览
0 评论
0 收藏
3.0分
赞助2元下载(无需注册)
温馨提示:本文档共7页,可预览 3 页,如浏览全部内容或当前文档出现乱码,可开通会员下载原始文档
下载文档到电脑,方便使用
赞助2元下载
本文档由
思安
于
2023-01-21 17:31:46
上传分享
举报
下载
原文档
(1.0 MB)
分享
给文档打分
您好可以输入
255
个字符
网站域名是多少( 答案:
github5.com
)
评论列表
暂时还没有评论,期待您的金玉良言
热门文档
GB-T 28534-2012 高压开关设备和控制设备中六氟化硫(SF6)气体的释放对环境和健康的影响.pdf
T-SOFIDPA 0004—2023 有机肥 好氧发酵 低碳技术规范.pdf
GB-T 39204-2022 信息安全技术 关键信息基础设施安全保护要求.pdf
GB-T 12771-2019 流体输送用不锈钢焊接钢管.pdf
中国移动通信企业标准 QB-018-2008 通信用不间断电源-UPS-V1.0.0 .pdf
YD-T 3763.6-2021 研发运营一体化(DevOps)能力成熟度模型 第6部分:安全及风险管理.pdf
GB-T 32213-2015 信息安全技术 公钥基础设施 远程口令鉴别与密钥建立规范.pdf
OWASP大语言模型应用程序十大风险V1.0.pdf
GB-T 41958-2022 浸胶帆布 导热性能试验方法.pdf
民航 MH-T 1076.1-2023 民航旅客行李全流程跟踪系统 第1部分:机场端建设规范.pdf
GB-T 25645-2010 信息技术 中文Linux服务器操作系统技术要求.pdf
ISO IEC 20924 2024 Internet of Things (IoT) and digital twin — Vocabulary.pdf
GB-T 42316-2023 分布式储能集中监控系统技术规范.pdf
T-BSRS 052—2021 核技术利用单位辐射事故应急预案的格式和内容.pdf
GB 12319-2022 中国海图图式.pdf
T-ZWCHEMA 001—2023 水利水电工程全过程工程咨询服务规程.pdf
GB-T 24936-2010 全地形车 术语.pdf
GB-T 14721-2010 林业资源分类与代码 森林类型.pdf
GB-T 19668.4-2017 信息技术服务监理第4部分信息安全监理规范.pdf
ISO IEC 27007-2020.pdf
1
/
3
7
评价文档
赞助2元 点击下载(1.0 MB)
回到顶部
×
微信扫码支付
2
元 自动下载
点击进入官方售后微信群
支付 完成后 如未跳转 点击这里 下载
×
分享,让知识传承更久远
×
文档举报
举报原因:
×
优惠下载该文档
免费下载 微信群 欢迎您
站内资源均来自网友分享或网络收集整理,若无意中侵犯到您的权利,敬请联系我们
微信(点击查看客服)
,我们将及时删除相关资源。