ICS 65.020.30 B 43 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T25881—2010 牛胚胎 Bovine embryo 2011-01-10发布 2011-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T25881—2010 前言 本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：北京锦绣大地农业股份有限公司、农业部种畜品质监督检验测试中心、北京科润 维德生物技术有限责任公司。 本标准主要起草人：张红霞、郭丽丽、刘艳军、吴亦芳、刘丑生、孙秀柱、张向利、肖静、安晶、孟昭雷 郭敏、王月、刘佳新、徐敬趁、李继成、王刚、李海洋、沈录智、曹克富、刘颖 1 GB/T 25881—2010 牛月 胎 胚 1范围 本标准规定了牛胚胎的生产要求、抽样、检测与判定以及包装、标识、贮存和运输等相关内容的技术 要求。 本标准适用于奶牛、兼用牛、肉牛的胚胎产品。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T2828.1一2003计数抽样检验程序第1部分：按接收质量限（AQL）检索的逐批检验抽样 计划 GB/T 2828.22008 计数抽样检验程序 第2部分：按极限质量（LQ）检索的抓立批检验抽样 方案 GB/T2828.11—2008计数抽样检验程序第11部分：小总体声称质量水平的评定程序 GB4143—2008牛冷冻精液 GB/T5458液氮生物容器 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 超低温保存 cryopreservation 经特殊方法处理的胚胎放置于一196℃（液氮）的超低温度中，使其新陈代谢暂时停止，从而将胚胎 进行长期保存。 3.2 胚胎解冻 embryo thawing 将冷冻保存的胚胎按一定的程序和方法在空气和水浴中融化，并脱除或不脱除冷冻保护剂（如乙二 醇），使胚胎恢复正常的形态和新陈代谢的过程。 3.3 胚胎体外培养invitroembryoculture 在模拟体内的环境和条件下，胚胎在体外继续发育的过程。 3. 4 胚胎移植 embryo transfer 将体内或体外生产的胚胎移植到受体母畜生殖道内，使其继续发育成正常个体的一种繁殖技术。 4生产要求 4.1种母牛 应具有种用价值，体质健康，无遗传病，无传染病。 1 GB/T25881—2010 4.2 种公牛和精液 种公牛应具有种用价值，体质健康，无遗传病，无传染病，其冷冻精液应符合GB4143一2008的 规定。 4.3系谱资料 胚胎应具有完整的系谱资料。 4.4牛胚胎发育阶段划分及编码标准 4.4.1牛胚胎发育阶段划分见表1。 表1牛胚胎发育阶段划分 发育阶段 形态描述 早期桑椹胚(5d~6d) 在16细胞～32细胞之间，形似桑椹，体积占透明带内腔50%~60% 致密桑椹胚(6d~7d) 在32细胞～64细胞之间，细胞团变小，界限不明显，体积占透明带内腔60%～70% 64细胞及以上，内细胞团的一部分出现发亮的囊胚腔，体积占透明带内腔70%～80%，难 早期囊胚(7d~8d) 以分清内细胞团和滋养层 囊胚(7d~8d) 内细胞团和滋养层界限清晰，囊胚腔明显，细胞团体积充满透明带内腔 囊胚腔明显扩大，体积增大到原来的1.2倍1.5倍，与透明带之间无空隙，透明带变薄， 扩张囊胚(8d~9d) 相当于正常厚度的1/3 孵化囊胚(9d~11 d) 由于囊胚腔继续扩大，致使透明带破裂，细胞团脱出 4.4.2胚胎发育阶段编码标准见附录A。 SAG 4.5牛胚胎分级评定 牛胚胎分级评定标准见表2，胚胎分级图片参见附录B。 表2牛胚胎分级评定标准 质量分级 评定标准 胚胎形态完整，轮廓清晰，呈球形，卵裂球大小均匀，结构紧凑，色调和透明度适中，胚胎 A级 细胞团呈均匀对称的球形，单个卵裂球（或细胞)的大小、颜色、密度一致，胚胎的发育阶段 与预期的发育阶段一致。透明带光滑，不规则的细胞相对较少，变性细胞不高于10% 轮廓清晰，色调及细胞密度良好，胚胎细胞团的大小和形状以及细胞的颜色和密度存在 B级 一定的不规则，有小部分游离细胞，胚胎的发育阶段与预期的发育阶段基本一致，变性细胞 的比例为10%～20% 胚胎细胞团的大小和形状以及细胞的颜色和密度存在严重的不规则。轮廓不清晰，色调 C级 发暗，结构较松散，游离的细胞或泡液较多，变性细胞的比例为30%～40% D级 死亡或退化的胚胎，有碎片、轮廓不清晰、结构松散，变性细胞比例高于50% 4.6 胚胎质量要求 胚胎产品冷冻前后的质量均应达到B级（含B级）以上为合格。 4.7 冷冻胚胎细管外观 细管无变形，无裂痕，两端封口严密，标识完整 5抽样 5.1生产方抽样检验 生产方和使用方为质量保证概率把关，按照GB/T2828.2一2008中的第4章，采用极限质量 （LQ一31.5），模式A抽样方案检索一次抽样方案确定抽检牛胚胎的样本量。 2 GB/T25881—2010 5.2质量监督抽样检验 量水平采用DQL=4，用第O检验水平抽样方案确定抽检母牛（胚胎）的样本量。 5.3复检和仲裁检验 复检根据原抽样方案确定，仲裁需抽样按照5.2规定的方案和6.6的判定规则。 6检测与判定 6.1细管外观 用目测法，其结果应符合4.7中的规定。 6.2新鲜胚胎 胚胎形态、质量分级评定结果应符合4.5中的规定。 6.3冷冻胚胎 6.3.1冷冻胚胎解冻方法 6.3.1.1器材 恒温水浴锅、实体显微镜。 6.3.1.2胚胎解冻液 含6%甘油，0.1mol/L蔗糖PBS胚胎解冻液； 含3%甘油，0.1mol/L蔗糖PBS胚胎解冻液； 不含甘油，0.1mol/L蔗糖PBS胚胎解冻液； PBS保存液。 6.3.1.3方法 6.3.1.3.1甘油冷冻胚胎解冻 将胚胎细管空气浴10S后置于35℃～37.℃水浴中，浸浴至胚胎冷冻细管彻底溶化。 将胚胎依次移人含6%甘油、0.1mol/L蔗糖PBS胚胎解冻液，含3%甘油、0.1mol/L蔗糖胚胎 PBS解冻液，不含甘油、O.1mol/L蔗糖PBS胚胎解冻液中，各停留5min，最后用PBS保存液洗3次， 即可进行镜检。 6.3.1.3.2乙二醇冷冻胚胎解冻 将胚胎细管空气浴10s后置于35℃~37℃水浴中，浸浴至胚胎冷冻细管彻底溶化，用PBS保存 液洗3次，即可进行镜检。 6.3.2冷冻胚胎质量评定 胚胎形态、质量分级评定结果应符合4.4及4.5中的规定。 6.4型式检验 检验项目及标准见4.1～4.7.是在生产方抽样检验、质量监督抽样检验和复检、仲裁检验时所选定 的检验。样品所检验项目中任何一项检验未达到本标准中技术要求的规定，则判为不合格 6.5检验项目及检验周期 每生产批入库、出站检验。 6.6抽样检验对群体质量水平的判定 6.6.1生产抽样检验的判定 引用GB/T2828.1一2003第3章中Ac为接收数，Re为拒收数，d为不合格品数。 可接收。 6.6.2质量监督抽样的判定 对抽取样本检验，按GB/T2828.11一2008中6.10的规定，当d<L（不合格品限定数），则抽检样 3