ICS 07.080 B 47 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3677—2020 家蚕微孢子虫荧光定量PCR 检测方法 Real timePCRmethod for detection of Nosema bombycis 行业标准信息服务平台 2020-08-26发布 2021-01-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3677—2020 本标准由农业农村部种植业管理司提出。 本标准由全国桑蚕业标准化技术委员会（SAC/TC437）口 本标准起草单位：江苏科技大学、中国农业科学院蚕业研究所、苏州大学、西南大学、农业农村部蚕桑 产业产品质量监督检验测试中心（镇江）。 本标准主要起草人：吴萍、沈中元、郭锡杰、张少伦、贡成良、潘敏慧、陈涛、商琪。 行业标准信息服务平台 NY/T3677—2020 家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法 1范围 本标准规定了家蚕微孢子虫（Nosemabombycis）的实时荧光定量PCR检测方法。 本标准适用于家蚕蚕卵及家蚕幼虫组织中微孢子虫的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可 1期的引用文件，仪 注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件 NIH GB/T 6682 分析实验室 用水规标和试 Q 3术语和定义 下列术语和定 用于平义 店 3.1 LS LUSrRNA RNAgen 家蚕微孢子 内大亚基 糖体水 3. 2 Ct值cyele 每个管内 光贺 所经历的循 的款 号达到 3.3 FTA卡滤膜片 linders technology associates card 弗林德斯技术 4原理 手列设计特异性引物进行 反应。利用荧光信 根据家蚕微孢 信号伙 Ct值判断供试样品 号伴随日的PCR产物 是否含有家蚕微孢子虫 5试剂与材料 除另有规定外，所用生化试剂均为分析纯，实验用水应符合GP 6682中一级水的规定。 5.1Tris-HCl(1mol/L，pH8.0)：称取12.10gTis碱至V分杯加人90mL超纯水溶解，加人适量浓 HCI调pH至8.0，定容至100mL，高压灭菌，室温保存。 5.2EDTA（0.5mol/L，pH8.0）：称取18.61gEDTA溶于90mL超纯水中，加入适量NaOH调节pH 至8.0，定容至100mL，高温灭菌后保存。 5.3TE缓冲液：分别量取5.1溶液5.0mL、5.2溶液1.0mL于烧杯中，加人400mL超纯水均匀混合 后，定容至500mL，高压灭菌，室温保存。 5.4TE-1缓冲液：分别量取5.1溶液5.0mL、5.2溶液0.1ml，于烧杯中，加人400mL超纯水均匀混 合后，定容至500mL，高压灭菌，室温保存。 5.530%KOH溶液：称取30.00gKOH至烧杯中，缓慢加入超纯水搅拌溶解后，定容至100mL，高压 灭菌，室温保存。 5.6玻璃珠（直径1.0mm）。 1