ICS 13.300;13.020.40 CCS A 80 中华人民共和国国家标准 GB/T42366—2023 化学品 静水椎实螺繁殖试验 Chemicals-Lymnaea stagnalis reproduction test 2023-03-17发布 2023-10-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T42366—2023 目 次 前言 引言 范围 规范性引用文件 2 3 术语、定义和缩略语· 试验原理 受试物信息 6 参比物 7 试验准备 试验程序 9 质量保证与质量控制 10 数据处理· 11 报告 附录A（资料性） 静水椎实螺的驯养 附录B(资料性） 异常卵 附录C（资料性） 时间-加权平均值的计算 附录D（资料性）饲养液更换，物理化学监测数据和喂食数据记录表 17 附录E（资料性) 静水椎实螺繁殖量和存活情况数据记录表 18 附录F（资料性） 静水椎实螺繁殖量数据的统计方法 20 参考文献 22 GB/T42366—2023 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 与化学品管理技术中心、中国检验检疫科学研究院、杭州瑞欧科技有限公司、厦门市格灵生物技术有限 公司、广东环境保护工程职业学院、广东全庆检测有限公司、西安凯金哲检测有限公司、金久科技有限 公司。 本文件主要起草人：许玫英、范雪滢、许玉洁、刘纯新、余明喧、梁秋、刘桃妹、窦从从、梅承芳 杨旭楠、周丽丽、冯宝欣、卢嘉慧、彭宜俊、吴才春、毛晓尧。 GB/T42366—2023 引言 关于软体动物毒性测试的综述性论文强调了有必要针对部分化学品开展水生软体动物繁殖毒性试 验，特别强调了这类重要的生态和经济生物的毒性测试方法的缺失。现有的繁殖试验方法很少涉及雌 雄同体的水生物种。 试验的测试终点是化学品在28d暴露期间，螺的存活数和每只螺产出的卵群数。每个亲本壳长的 增长量和产卵数量也可作为附加的测试终点。 如采用本方法对混合物开展测试并将获得的数据用于监管时，需考虑试验结果是否充分且有效。 如有法规明确规定可对混合物进行测试，则可直接采用本文件。 Ⅱ GB/T42366—2023 化学品静水椎实螺繁殖试验 1范围 本文件描述了化学品静水椎实螺繁殖试验的试验原理、受试物信息、参比物、试验准备、试验程序、 质量保证与质量控制、数据处理、报告。 本文件用于评价长期暴露下化学品对雌雄同体的淡水螺静水椎实螺（Lymnaea stagnalis）生存和 繁殖的潜在影响。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T 21801 化学品 快速生物降解性 呼吸计量法试验 GB/T 21802 化学品 快速生物降解性改进的MITI试验（I) GB/T 21803 化学品 快速生物降解性DOC消减试验 GB/T 21831 化学品 快速生物降解性密闭瓶法试验 GB/T21856 化学品 快速生物降解性 二氧化碳产生试验 GB/T21857 化学品 快速生物降解性改进的OECD筛选试验 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 x%效应浓度x%effectiveconcentration；EC 在给定测试周期内，与对照组相比，导致静水椎实螺繁殖量降低%时的受试物浓度。 3.1.2 最低可观察效应浓度 lowest observed effect concentration;LOEC 暴露期间与对照组相比，对受试生物产生显著效应（p<0.05）的最低受试物浓度，LOEC以上的所 有试验浓度所产生的毒性效应等于或者显著高于LOEC中所观察到的毒性效应。 3.1.3 无可观察效应浓度noobservedeffectconcentration；NOE 试验中低于LOEC的最高受试物测试浓度，即在暴露期间与对照组相比，对受试生物未产生显著 效应（p≥0.05)的受试物浓度。 3.1.4 个体存活天数 number of individual-day;NID 个体的总观察期。 注：在此期间，个体均参与繁殖。 1 GB/T423662023 3.1.5 繁殖能力 fecundity 生物体的实际繁殖率。 注：由卵群数量或产卵数来衡量。 3.1.6 亲代 parentanimals 以其繁殖量为试验终点的繁殖成体。 3.1.7 繁殖量 reproductive output 28d试验周期内，每个存活亲代产生的子代数量。 3.2 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 TWA：时间-加权平均值(TimeWeightedAverage) 4试验原理 试验主要用于评估受试物对静水椎实螺繁殖量的影响。将用于繁殖的亲螺暴露于一定浓度范围的 受试物中，观察螺的存活数和繁殖量，试验周期为28d。椎实螺需取自无寄生物的试验环境，在试验前 测量螺的大小，并放人试验容器中养。在添加受试物（测试的第0d)后，每天在喂食螺时记录存活 率，并将死螺从试验容器中取出。每周至少2次测定螺的繁殖量，收集卵群，并计数。也可用每个卵群 中的产卵数以及试验开始和结束时的壳长作为附加的测试终点。试验需记录存活亲螺数量和每个试验 容器中卵群的数量。繁殖量反映每个存活亲螺的卵群产量。其他与受试物效应相关的参数，如每个存 活亲螺的产卵数和生长情况（壳长）也宜记录。受试物对个体存活天数内每天卵群累积量的毒性效 应，以EC，表示。可利用回归模型估算导致繁殖量出现%下降时的受试物浓度。受试物的毒性效应 也可用NOEC和LOEC表示。同一试验中可同时得到EC.值、NOEC和LOEC。 5受试物信息 试验前，应掌握下列受试物信息： 结构式； b) 纯度； c) 光稳定性； 试验条件下的稳定性； e) 解离常数(pK.）； f) 正辛醇-水分配系数（Pw）； 按照GB/T21801、GB/T21802、GB/T21803、GB/T21831、GB/T21856、GB/T21857测定 g) 的快速生物降解性； h) 水中溶解度； 蒸气压； j) 受试物在试验溶液中的定量分析方法、方法回收率和定量限 2 GB/T42366—2023 6参比物 为确保试验条件的一致性和受试生物的敏感性，测试中宜设置参比物试验。已通过验证的参比物 为氯化镉，其繁殖量EC5o值范围为40μg/L～230μg/L（以Cd计）。 7试验准备 7.11 仪器设备 与试验溶液直接接触的容器及其他设备应由玻璃或其他惰性材料制成，常用的仪器设备包括： a） 用于控温的人工气候箱、恒温室或其他适用的设备； b) 用于调节光照的设备和光照强度的测量设备； 溶氧仪调节； d) pH计; 电导率仪； f) 用于测量水硬度的试剂盒或其他适用的设备； g) 用于测量水中氨氮、亚硝酸盐和硝酸盐浓度的试剂盒或其他相关的设备； h) 1L玻璃容器，可用开孔盖、网或其他器具覆盖，保证容器的透气性且能防止螺从容器内爬出； i) 气泵、通气管和巴斯德管； 气流调节阀； j) k) 数显游标卡尺； 1) 刀片或尖勺； m) 配有光源的体视显微镜（用于卵的计数）； n) 用于配制溶液的容量瓶和其他玻璃器皿； o） 玻璃滴管。 7.2受试生物 7.2.1受试生物的选择 试验推荐的受试生物为静水椎实螺（Lymnaeastagnalis）。试验中所使用的成螺应取自同一实验 室在无寄生物环境下驯养的群体。静水椎实螺的驯养环境条件（特别是光照和温度）应与试验环境条件 相似（静水椎实螺的驯养程序参考附录A）。野外采集的群体不宜立即用于繁殖试验。 7.2.2受试生物的准备 试验开始时，用于试验的静水椎实螺壳长应在2.5cm～3.0cm范围内，使用数显游标卡尺测量最 大壳长，检查长度是否满足要求。测量过程中应谨慎操作，不宜破坏壳体，测量或操作过程中需注意保 护壳尖。 7.3试验用水 7.3.1试验用水可使用经活性炭过滤脱氯的自来水、重组水或其他清洁用水，水质需符合7.3.2的要 求。不宜使用自来水，水管中可能含有或释放金属铜，铜对受试生物具有较大毒性作用，不利于实验室 间的结果比对。试验用水宜与饲养液保持一致（见附录A）。试验用水及更换用的水，在使用前的温度 和溶解氧浓度应达到试验要求。 3