ICS 65. 02 CCS B43 DB5134 四川省（凉山彝族自治州）地方标淮 DB 5134/T 40 —2023 美姑山羊人工授精技术规程 地方标准信息服务平台 2023-12 -05 发布 2023-12-30实施 凉山彝族自治州市场监督管理局 发布 DB5134/T40—2023 目次 1范围 2规范性引用文件 3术语和定义 4种公羊的选择与训练 5采精、 6精液品质检查 7精液稀释， 8母羊同期发情. 9母羊发情鉴定 10输精 附录A （资料性附录） 美姑山羊人工授精站所需仪器、设备 地方标准信息服务平台 DB5134/T40—2023 前言 本标准按照GB/T1.1和GB/T1.2进行编写。 本标准由凉山彝族自治州农业农村局归口。 本标准由美姑县养殖技术推广中心、四川农业大学、凉山彝族自治州农业科学研究院提出并起草。 本标准由美姑县养殖技术推广中心、四川农业大学、凉山彝族自治州农业科学研究院负责解释。 本标准主要起草人：沙马说布、王林杰、杨世忠、阿西伍牛、占思远、阿尔阿布、勒格阿作、付开 棉、陈益、安拉扎、孟群英、吉色曲伍、范景胜、阿则晓龙、彭航馨。 地方标准信息服务平台 1I DB5134/T40—2023 美姑山羊人工授精技术规程 1范围 本标准规定了美姑山羊种公羊选择、采精、精液品质检查、精液稀释、母羊同期发情、母羊发情鉴 定和输精等主要技术环节。 本标准适用于凉山州美姑山羊种羊场、种羊生产专业户和美姑山羊人工授精站。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 1236 绵、山羊生产性能测定技术规范 DB5134/T2 美姑山羊 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 美姑山羊 美姑山羊被毛黑色，以黑色为主。头大小中等，两耳短侧立，鼻梁微拱，角多为弓形，多有胡须， 有肉髯者约占30%，蹄质坚实，蹄冠黑色，短瘦尾。 准信息 3. 2 人工授精 是指借助于专门器械，用人工方法采取公羊的精液，经体外检查与处理后，输入发情母羊的生殖道 内，使其受胎的一种繁殖技术。 3. 3 同期发情 用孕激素制剂处理，采用CIDR(羊用孕激素阴道栓)+PMSG法，促使母羊在同一时间发情。 3. 4 假阴道 1 DB5134/T402023 采精用具，由硬橡胶外壳、柔软橡胶内膜和带夹层玻璃集精杯组成，简状结构，用前组装。 3: 5 精子活力 37℃温度镜检，直线前进运动精子占总数的百分比。 3: 6 精子密度 每毫升精液中所含精子数，分密、中、稀三级。 4种公羊的选择与训练 4.1种公羊的选择 种公羊的选择应参照DB5134/T2执行，具有种用体况，达到二级以上标准。 4.2采精训练 对于初次参加采精的种公羊，在配种前1个月驱除内、外寄生虫，同时应有计划地进行调教，每天 保持3h～5h运动时间。在配种开始前1个月，定人定时，每天采精一次，两周以后每两天一次，每次 均应取样进行精液品质检查，精子活力不低于0.8。 5采精 5.1采精场地 要求采精室面积10m15m、精液品质检查室10m²和输精室10m，室温保持在18℃~25℃。人工授 精站要求地面平坦而防滑，环境安静，卫生状况良好。 标准信息服务平 5.2采精前的准备 5.2.1用具的准备和消毒 5.2.1.1用具的准备 用具准备包括显微镜、假阴道、集精杯等，详见附录 5.2.1.2用具的消毒 凡是和精液可能接触的器械均应消毒处理。输精器械用2%的重碳酸钠和1.5%的碳酸钠溶液反复冲 洗后，再用清水冲2次～3次，最后用蒸馏水冲洗后悬于室内，自然干燥，使用前再用生理盐水冲洗2 次～3次。毛巾、台布、纱布、盖布等用肥皂水洗涤后，再用清水清洗，干燥备用。 5.2.2假阴道的安装 将假阴道各部件充分洗涤干净，用蒸馏水冲洗后，放在消毒柜中干燥，安装前将瓷盘用75%酒精消 毒。逐件检查各部件是否有破损、漏水、针眼。首先，将内胎光面向里，向外翻到外壳上，将集精杯安 2 DB5134/T40—2023 装在假阴道上，用纱布套和皮圈固定；其次，从外壳中央小孔在内胎与夹壁间注入50℃～55℃热水， 约占1/2体积；用消毒的玻璃棒蘸取少量凡士林或石蜡油，从外口向内均匀涂抹，涂抹深度为假阴道长 度的1/2；内胎充气至压力适当（假阴道外口的内胎呈Y型，温度计插入时感到有一定阻力），用消毒 的温度计插入假阴道内检查温度，以保证采精时温度达到40℃～42℃。 5.3人工采精 人工采精最好选择发情母羊做台羊，也可以选择固定台羊。采精时，采精人员右手紧握假阴道，用 食指、中指夹好集精瓶，使假阴道活塞朝下，于台羊的右后侧。待公羊爬跨台羊且阴茎伸出时，采精 人员用左手轻拨公羊包皮（勿触龟头），将阴茎导入假阴道（假阴道应与地面呈35。角）。公羊向上 一冲，说明已经射精。待公羊跳下，立即放掉假阴道内空气，并垂直放置。打开活塞上的气嘴，放出空 气，取下集精瓶，进行精液品质检查。种公羊每天可采精2次3次，第一、二次采精后休息2h方可 进行第三次采精，每周休息1d。采精后要及时做好种公羊采精记录。 6精液品质检查 6.1肉眼检查 6.1.1射精量 成年公羊每次射精量为0.5mL～2mL，一般为1mL。 6.1.2色泽 正常的精液为乳白色。凡呈深黄、灰、青、红和绿色或有絮状物者，均表示不正常，不能用于输精。 6.1.3气味 正常的精液略有腥味。凡有腐臭味或异味者，均表示不正常，不能用于输精。 6.1.4云雾状 肉眼观察采到的新鲜精液，可以看到由于精子活动所引起的像云雾状似的翻腾滚动。精子的密度越 6.2显微镜检查 6.2.1方法 用玻棒沾取少量原精液在载玻片上用400倍～600倍的生物显微镜观察，可以评定精子的密度和活 力指标。 6.2.2活力指标 以五级评定。100%的精子做直线前进运动者为一级；80%为二级；60%为三级；40%为四级；20%以下 者为五级。三级以上者可用于输精。 6.2.3密度指标 以“密、中、稀”评定。“密”：精子数充满视野，精子间无空袭；“中”：精子之间有明显的空 隙，彼此之间的距离大约1个～2个精子；“稀”，只有少数精子，精子之间的空隙超过2个以上。在 3 DB5134/T40—2023 视野中没有看到精子的，用“无”标记。用于输精的精液，其精子密度至少是“中”。 7精液稀释 7.1精液稀释液的配制 ：7.1.1生理盐水稀释液 用注射用生理盐水或经过过滤消毒的0.9%氯化钠溶液作为稀释液。按照1：6稀释输精0.3mL。 7.1.2葡萄糖-卵黄稀释液 于100mL蒸馏水中加葡萄糖3g，柠檬酸钠1.4g，溶解后过滤3次～4次，蒸汽灭菌，冷却至室温， 加新鲜鸡蛋的卵黄20mL，青霉素10万U，链霉素10万U，充分混匀。按照1：6稀释输精0.3mL。 7.2稀释倍数 在进行高倍稀释时需分两步进行，先低倍稀释，数分钟后再作高倍稀释。精液在稀释前必须进行活 力和密度检查，然后确定稀释倍数。稀释后的精液，每毫升精液的有效精子数不得少于7亿个。 7.3精液稀释操作 精液与稀释液混合时，二者的温度必须保持一致，以防止精子受温度的剧烈变化而死亡。稀释前将 精液与稀释液同放入30℃左右的温水中水浴5min左右，温度相同时再进行稀释。用消毒过的带有刻度 的注射器将稀释液沿着精液瓶缓慢注入，然后用玻璃棒缓慢搅动混合均匀。在进行高倍稀释时需分两步 进行，先低倍稀释，数分钟后再作高倍稀释。 7.4精液的保存和运输 低温保存的液状精液，可用广口保温瓶运送。把装有精液的安或细管放入广口保温瓶后，贴上标 签，注明公羊号、采精时间、精液量、稀释倍数及其等级等内容。运输时应严防剧烈震荡，并尽量缩短 运输时间。精液如果不立即使用，用纱布包裹后，放入4℃左右的冰箱中保存待用。精液在采得以后稀 释愈早，及时输精，受胎效果愈好。但美姑山羊精液保存的时间较短，如果要长期保存精液，应制成冷 准信息服 冻颗粒精液或冷冻的细管精液。 8母羊同期发情 8.1方法 同期发情通常采用放置孕激素阴道栓（CIDR）+注射孕马血清促性腺激素（PMSG）法。 8.2放置孕激素阴道栓 放置阴道栓时，首先用0.2%新洁尔灭消毒剂喷洒母羊外阴部消毒。然后用止血钳夹住羊用棉栓外 管，在导管前端涂上适量凡士林，分开阴门，将导管插入阴门，一手固定导管，另一手持止血钳夹住棉 栓外管缓慢向前推送，使阴道栓留于阴道内，拉线露出阴门外3cm左右，把导管抽出。 8.3注射孕马血清促性腺激素 用孕激素制剂处理母羊11d，拉住阴道栓外露拉线，缓慢用力撤出阴道栓。再注射孕马血清促性腺 4