(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211262969.7 (22)申请日 2022.10.14 (71)申请人 上海市胸科医院 地址 200030 上海市徐汇区淮 海西路241号 (72)发明人 王佳谊　曾冰洁　马丽芳　杨义然　 王先照　秦越洋　曹雷群　 (74)专利代理 机构 上海尚象专利代理有限公司 31335 专利代理师 张园园 (51)Int.Cl. C12M 3/00(2006.01) C12M 1/22(2006.01) C12M 1/00(2006.01) C12N 5/09(2010.01) (54)发明名称 一种用于肿瘤相关成纤维细胞提取和培养 的装置与方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于肿瘤相关成纤维细 胞提取和培养的装置与方法， 该装置包括培养皿 和设置在培养皿中的样品架， 以及上覆盖和下覆 盖； 样品架上设有若干垂直向下的样品孔， 每个 样品孔的底部分别设有一个样品柱。 样品柱为梯 形圆台状， 通过纤维丝与所在的样品孔连接， 将 样品柱粘合固定在样品孔内的底部中央位置； 样 品柱的梯形圆台上喷涂了减少细胞黏附的涂层。 样品孔底部和下覆盖内分别镶嵌有磁力相斥的 磁条。 本发 明还提供了将该装置用于肿瘤相关成 纤维细胞提取和培养的方法。 本发 明建立了更加 高效、 便捷、 省时、 减少污染的肿瘤相关成 纤维细 胞培养与维持等关键技术环节的改进方法， 同时 通过结构设计改变， 提高了肿瘤相关成 纤维细胞 的提取效率。 权利要求书2页 说明书6页 附图3页 CN 115491304 A 2022.12.20 CN 115491304 A 1.一种用于肿瘤相关成纤维细胞提取和培养的装置， 其特征在于， 所述的装置包括培 养皿和设置在培养皿中的样品架， 以及上覆盖和下覆盖； 样品架上设有若干垂直向下 的样 品孔， 每个样品孔内的底部分别设有一个样品柱。 2.根据权利要求1所述的用于肿瘤相关成纤维细胞提取和培养的装置， 其特征在于， 所 述的装置中， 样品架的上部在样品孔外设有搁置条， 通过将样品架周围的搁置条卡置在培 养皿的侧壁外沿上， 使样品孔悬浮在培 养皿中， 而不 沉入培养皿底部 。 3.根据权利要求2所述的用于肿瘤相关成纤维细胞提取和培养的装置， 其特征在于， 所 述的装置中， 样品柱为梯形圆台状， 位于样品孔的底端； 样品柱通过若干纤维丝与所在的样 品孔连接， 将样品柱粘合固定在样品孔内的底部中央位置， 样品柱的底部与样品孔的内侧 孔壁之间留有空隙； 样品柱的梯形圆台上表面和侧壁上均匀地喷涂了减少细胞黏附的涂 层。 4.根据权利要求3所述的用于肿瘤相关成纤维细胞提取和培养的装置， 其特征在于， 所 述的装置中， 在样品孔的底部周围设有环形的样品孔磁条。 5.根据权利要求4所述的用于肿瘤相关成纤维细胞提取和培养的装置， 其特征在于， 所 述的装置中， 上覆盖扣置在培养皿的顶部， 将 培养皿和样品孔覆盖； 下覆盖 设置在培养皿的 底部， 下覆盖内镶嵌有环形的下覆盖磁条， 与样品孔磁条的尺寸对应且磁力相斥。 6.一种根据权利要求1～5中任意一项所述的装置用于肿瘤相关成纤维细胞提取和培 养的方法， 其特 征在于， 该 方法包含： 步骤1， 取肿瘤组织块， 冰上分离筋膜、 血管和腐败组织， 用手术刀将组织切片， 放入离 心管内， 加入 含抗生素且预冷的洗涤液， 通过 水平脱色摇床进行洗涤； 步骤2， 使用移液器吸取组织块， 转入新的离心管内， 加入含抗生素且预冷的洗涤液， 通 过水平脱色摇床进行洗涤； 步骤3， 再使用移液器吸取组织块， 转入新的离心管内， 加入红细胞裂解液， 通过水平脱 色摇床洗涤， 去除组织内造成污染的红细胞； 步骤4， 使用移液器吸取组织块， 转入新的离心管内， 加入含抗生素且预冷的洗涤液， 通 过水平脱色摇床洗涤， 共洗涤3次； 步骤5， 将洗涤完成的组织块以最大表面积向下的方式， 放入样品架的样品孔内的样品 柱上， 并贴合样品柱的平台表面， 再将 样品架放入培 养箱内无 血清培养20分钟； 步骤6， 在培养皿内加入含有抗生素的完全培养基， 再将步骤5中的装有组织块并进行 无血清培养后的、 设有样品孔的样品架置入培养皿内， 通过增加或减少培养基， 以保证完全 培养基浸没样品柱上的组织； 步骤7， 将插入样品孔的培养皿， 放置在下覆盖上并旋转调整角度， 以保证样品孔因磁 力相斥而悬浮在培 养皿内， 然后进行培 养。 7.根据权利要求6所述的用于肿瘤相关成纤维细胞提取和培养的方法， 其特征在于， 所 述的方法中， 洗涤液的用量为25 mg组织块加入500 μL洗涤液； 红细胞裂解液的用量与洗涤液 的用量相同。 8.根据权利要求6所述的用于肿瘤相关成纤维细胞提取和培养的方法， 其特征在于， 所 述的步骤1中， 组织切片的大小为2m m×2mm×1mm的薄片。 9.根据权利要求6所述的用于肿瘤相关成纤维细胞提取和培养的方法， 其特征在于， 所权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115491304 A 2述的步骤1和2中的洗涤， 都采用水平脱色摇床， 以90rpm洗涤10分钟； 步骤3中是采用水平脱 色摇床， 以90rpm洗涤15分钟； 步骤4中则是采用水平脱色摇床， 每次以90rpm洗涤5分钟， 共 洗涤3次。 10.根据权利要求6所述的用于肿瘤相关成纤维细胞提取和培养的方法， 其特征在于， 所述的步骤6中， 完全培 养基是采用DM EM培养基， 并按质量百分比计加入10％的胎牛 血清。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115491304 A 3