(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211211359.4 (22)申请日 2022.09.30 (71)申请人 北京科途医学 科技有限公司 地址 100176 北京市大兴区经济技 术开发 区汇龙森科技园7幢2单 元302室 申请人 科途 （固安） 生物科技有限公司 (72)发明人 孙鲁波　秦娇　孙志坚　肖金平　 (74)专利代理 机构 北京英创嘉友知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11447 专利代理师 董琳 (51)Int.Cl. C12N 5/09(2010.01) C12N 5/0735(2010.01) C12N 5/00(2006.01) C12M 3/04(2006.01)C12M 1/22(2006.01) C12M 1/00(2006.01) (54)发明名称 一种培养类器官的方法和类器官的培养装 置 (57)摘要 本发明提供一种培养类器官的方法， 该方法 包括： 将滋养层细胞进行终止分裂处理， 得到处 理后的滋养层细胞； 在培养容器中， 将所述处理 后的滋养层细胞进行贴壁培养， 得到贴壁后的滋 养层细胞； 将 含有类器官种子细胞和水凝胶的液 态凝胶覆盖在所述贴壁后的滋养层细胞上， 并使 得所述液态凝胶凝固， 得到类器官生长凝胶层； 在所述类器官生长凝胶层上加入液相的补充培 养基， 得到 液相培养基层， 并进行培养。 本发明还 提供了一种类器官的培养装置。 通过上述技术方 案， 本发明在建模效率、 模型稳定性、 肿瘤类器官 癌细胞丰度保持以及对药物的临床相关性上都 具有优势， 进而为药物筛选和评价提供了更加接 近人体的系统。 权利要求书1页 说明书7页 附图11页 CN 115305240 A 2022.11.08 CN 115305240 A 1.一种培 养类器官的方法， 其特 征在于， 该 方法包括： 将滋养层 细胞进行终止分裂处 理， 得到处 理后的滋养层 细胞； 在培养容器中， 将所述处 理后的滋养层 细胞进行贴壁培 养， 得到贴壁后的滋养层 细胞； 将含有类器官种子细胞和水凝胶的液态凝胶覆盖在所述贴壁后的滋养层细胞上， 并使 得所述液态凝胶凝固， 得到类 器官生长 凝胶层； 在所述类 器官生长 凝胶层上加入液相的补充培 养基， 得到液相培 养基层， 并进行培 养。 2.根据权利要求1所述的方法， 其中， 所述滋养层细胞包括小鼠胚成纤维细胞、 小鼠胚 胎成纤维细胞、 大鼠肝细胞、 肿瘤相关成纤维细胞、 人子 宫内膜基质细胞和小鼠子 宫内膜基 质细胞中的至少一种。 3.根据权利要求1或2所述的方法， 其中， 所述终止分裂处理包括丝裂霉素 ‑C处理或γ ‑ 射线处理； 所述丝裂 霉素‑C处理中， 丝裂 霉素‑C的终浓度为5 ‑20 μg/mL。 4.根据权利要求1所述的方法， 其中， 所述贴壁培养的培养基为添加1 ‑10提交%血清的 MEM培养基、 DMEM培养基、 RPMI ‑640培养基和F12培养基中的至少一种； 所述处理后的滋养层 细胞在贴壁培 养时的接种细胞密度为0.5 ‑2×10 4 cells/cm2。 5.根据权利要求1所述的方法， 其中， 所述液态凝胶含有类器官培养基、 类器官种子细 胞和水凝胶； 所述类器官种子细胞为原代肿瘤细胞、 PDX分离的癌细胞、 类器官传代细胞、 胚 胎干细胞、 诱导重编程细胞和正常成体细胞中的至少一种， 所述类器官种子细胞在所述液 态凝胶中的接种细胞密度为0.5 ‑5×106 cells/mL； 所述水凝胶在所述液态凝胶中的含量 为10‑90体积%； 所述水凝胶 在1‑10℃下为液态， 并且在20 ‑40℃下为固态。 6.根据权利要求5所述的方法， 其中， 所述类器官培养基和所述补充培养基为生长因子 弱化的培 养基； 所述生长因子弱化的培养基含有Ad ‑DMEM/F12培养基， 并且还含有0.5 ‑2倍浓度的B27 添加剂， 1 ‑1.5 mM的N‑Acetylcystein， 5 ‑20 mM的nicotinamide， 1 ‑20ng/ml的Noggin， 50 ‑ 200ng/ml的R ‑spondin‑1， 3‑10ng/ml的Wnt ‑3a， 1‑5ng/ml的人重组EGF， 1 ‑10 ng/mL的人重 组FGF‑2， 1‑10ng/mL的人重组FGF ‑7， 5‑20ng/mL的人重组FGF ‑10， 300‑700 nM的A83‑01， 0.5‑2mM的SB202190以及3 ‑7 mM的Y‑27632。 7.根据权利要求5所述的方法， 其中， 所述水凝胶包括基质胶、 胶原凝胶、 合成水凝胶中 的至少一种； 所述液态凝胶的温度为1 ‑10℃； 所述类器官生长凝胶层的温度为20 ‑40℃； 所 述补充培 养基的温度为20 ‑40℃。 8.根据权利要求1所述的方法， 其中， 所述类器官生长凝胶层和液相培养基层的厚度比 为1： （0.5 ‑5） 。 9.一种类 器官的培 养装置， 其特 征在于， 该培 养装置包括： 适合细胞贴壁 生长的培 养容器； 生长在所述适合细胞贴壁生长的培养容器 内底面上的贴壁后的滋养层细胞； 所述滋养 层细胞为终止分裂处 理后的滋养层 细胞； 覆盖在所述贴壁后的滋养层细胞上的类器官生长凝胶层； 所述类器官生长凝胶层由液 态凝胶固化后形成， 所述液态凝胶含有类 器官种子细胞和水凝胶； 覆盖在所述类 器官生长 凝胶层上的液相培 养基层。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115305240 A 2一种培养类器 官的方法和类器 官的培养装 置 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药领域， 具体地， 涉及一种培养类器官的方法和一种类器官的 培养装置。 背景技术 [0002]类器官技术是一种体外3D细胞培养的技术。 该技术能把源于胚胎干细胞， IPS诱导 多能干细胞、 成体细胞或者来自疾病患者的细胞在体外实现高成功率培养， 并能保留肿瘤 体内的一些组织结构特 征， 遗传特 征和药效生物学 特征。 [0003]肿瘤类器官的特点有： 高度模拟肿瘤 体内特征； 建模 成功率高、 成本低、 速度快； 可 以实现高通量药物、 靶点和生物标志物筛选； 活组织细胞可冻存， 建立活标本库， 随时复苏 活细胞， 可衍生遗传数据库、 药效数据库、 临床数据库、 蛋白组数据库、 表达谱数据库， 具有 可拓展性。 因此， 肿瘤类器官技术在肿瘤个性化医疗、 新药研发和健康大数据领域具有很高 的实用价 值。 [0004]已有的类器官培养方法采用包埋法， 其中， 细胞通过和水凝胶混合， 滴加在细胞培 养皿中， 待水凝胶凝固后， 在周围添加含有生长因子等成分的培 养基。 [0005]但是， 类器官的建模效率和稳定性还需要 进一步提高。 发明内容 [0006]本发明的目的是进一 步提高类器官的建模效率和稳定性。 [0007]为了实现上述目的， 本发明提供一种培养类器官的方法， 该方法包括： 将滋养层细 胞进行终止 分裂处理， 得到处理后的滋养层细胞； 在培养容器中， 将所述处理后的滋养层细 胞进行贴壁培养， 得到贴壁后的滋养层细胞； 将含有类器官种子细胞和水凝胶的液态凝胶 覆盖在所述贴壁后的滋养层细胞上， 并使 得所述液态凝胶凝固， 得到类器官生长凝胶层； 在 所述类器官生长 凝胶层上加入液相的补充培 养基， 得到液相培 养基层， 并进行培 养。 [0008]本发明还提供了一种类器官的培养装置， 该培养装置包括： 适合滋养层细胞贴壁 生长的培养容器； 生长在所述培养容器内底面上 的贴壁后的滋养层细胞； 所述滋养层细胞 为终止分裂处理后的滋养层细胞； 覆盖在所述贴壁后的滋养层细胞上的类器官生长凝胶 层； 所述类器官生长凝胶层由液态凝胶固化后形成， 所述液态凝胶含有类器官种子细胞和 水凝胶； 覆盖在所述类 器官生长 凝胶层上的液相培 养基层。 [0009]通过上述技术方案， 本发明在建模效率， 模型稳定性、 肿瘤类器官癌细胞丰度保持 以及对药物的临床相关性上都具有优势， 进而为肿瘤免疫 药物筛选和评价提供了更加接近 人体的系统。 [0010]本发明的其 他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。 附图说明 [0011]附图是用来提供对本发明的进一步理解， 并且构成说明书的一部分， 与下面的具说　明　书 1/7 页 3 CN 115305240 A 3