(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211184548.7 (22)申请日 2022.09.27 (71)申请人 浙江工业大 学 地址 310014 浙江省杭州市拱 墅区潮王路 18号 (72)发明人 杜理华　盛志恺　张诗依　林航　 罗锡平　黄佳怡　张澳莹　张嘉城　 章晨阳　谭昆林　谢菡佳　薛苗　 郑灵演　潘悦　郭梓良　张扬帆　 (74)专利代理 机构 杭州天正专利事务所有限公 司 33201 专利代理师 黄美娟　黄竞云 (51)Int.Cl. C12P 17/18(2006.01) C12M 1/40(2006.01)C12M 1/38(2006.01) C12M 1/00(2006.01) B01J 19/00(2006.01) (54)发明名称 一种酶促在线合成腺嘌呤迈克尔加成衍生 物的方法 (57)摘要 本发明提供了一种酶促在线合成腺嘌呤迈 克尔加成衍生物的方法， 腺嘌呤和丙烯酸酯类化 合物在微流控通道反应器中 利用脂肪酶 Lipozyme  RM IM催化在线合成腺嘌呤迈克尔加 成衍生物。 该法不仅大大地缩短了反应时间， 而 且具有高的转化率； 同时首次利用经济的脂肪酶 Lipozyme  RM IM催化腺嘌呤与丙烯酸酯的迈克 尔加成反应， 降低了反应成本， 具有经济高效的 优势。 权利要求书2页 说明书6页 附图1页 CN 115478086 A 2022.12.16 CN 115478086 A 1.一种在线合成腺嘌呤迈克尔加成衍生物的方法， 其特征在于： 所述方法采用微流控 通道反应器， 所述的微流控通道反应器包括依次连接的注射器、 反应通道和产 物收集器， 所 述注射器安装于注射泵中， 所述的注射器通过第一连接管道与反应通道入口连接， 所述产 物收集器通过第二连接管道与反应通道出口连接， 所述反应通道内径 为1.6‑2.2mm， 反应通 道长为0.8 ‑1.2m； 所述方法包括： 以DMF为反应溶剂， 式(I)所示腺嘌呤和式(II)所示丙烯酸酯类化合物为原料， 脂肪酶 Lipozyme  RM IM为催化剂构建反应体系； 将所述原料和所述反应溶剂置于注射器中， 将脂 肪酶Lipozyme  RM IM均匀填充在微流控通道反应器的反应通道中， 在注射泵的同步推动 下， 使所述原料和所述反应溶剂连续通入反应通道中进行迈克尔加成反应， 控制反应温度 为30～55℃， 反应液在反应通道内连续流动的反应时间为10～60min， 通过产物收集器在 线 收集流出反应通道的反应液， 所述反应液经后处理， 得到式(III)所示腺嘌 呤迈克尔加成衍 生物； 式(II)、 (III)中， R为C H3或C2H5或C4H9或C(CH3)3； 所述式(I)所示腺嘌呤与式(II)所示丙烯酸酯类化合物的物质的量之比为1： 1～5； 在 所述反应通道可容纳所填充催化剂的最大限度内， 催化剂的加入量以反应溶剂的体积计为 0.030g/mL～0.060g/mL； 所述反应体系中， 式(I)所示腺嘌呤的浓度为0.1mmol/mL～ 0.4mmol/mL。 2.如权利要求1所述的在线合成腺嘌呤迈克尔加成衍 生物的方法， 其特 征在于： R为C H3。 3.如权利要求1所述的在线合成腺嘌呤迈克尔加成衍生物的方法， 其特征在于： 所述式 (I)所示腺嘌呤与式(I I)所示丙烯酸酯类化 合物的物质的量之比为1： 4。 4.如权利要求1所述的在线合成腺嘌呤迈克尔加成衍生物的方法， 其特征在于： 催化剂 的加入量以反应溶剂的体积计为0.043g/mL。 5.如权利要求1所述的在线合成腺嘌呤迈克尔加成衍生物的方法， 其特征在于： 所述反 应体系中， 式(I)所示腺嘌呤 的浓度为0.25m mol/mL。 6.如权利要求1所述的在线合成腺嘌呤迈克尔加成衍生物的方法， 其特征在于： 所述注 射器的数目为两个。 7.如权利要求6所述的在线合成腺嘌呤迈克尔加成衍生物的方法， 其特征在于： 所述的 注射器分别是第一注射器与第二注射器， 所述的第一连接管道为Y型或T型管道， 所述的第 一注射器与第二注注射器分别连接在所述的Y型或T 型管道的两个接口并通过所述的Y型或 T型管道与所述的反应通道串联。 8.如权利要求7所述的在线合成腺嘌呤迈克尔加成衍生物 的方法， 其特征在于： 式(I) 所示腺嘌呤和式(II)所示丙烯酸酯类化合物各自用DMF溶解， 得到腺嘌呤溶液和丙烯酸酯 类化合物溶液， 再分别经所述第一注射器与第二注射器进入所述反应通道； 所述腺嘌呤溶 液中， 式(I)所示腺嘌呤的浓度为0.2mmol/mL～0.8mmol/mL， 所述丙烯酸酯类化合物溶液权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115478086 A 2中， 式(II)所示丙烯酸酯类化 合物的浓度为0.5～ 2.5mmol/mL。 9.如权利要求6所述的在线合成腺嘌呤迈克尔加成衍生物的方法， 其特征在于： 所述方 法采用微流控通道反应器， 所述的微流控通道反应器包括依 次连接的注射器、 反应通道和 产物收集器， 所述注射器安装于注射泵中， 所述的注射器通过第一连接管道与反应通道入 口连接， 所述产 物收集器通过第二连接管道与反应通道出口连接， 所述反应通道内径为 1.6 ～2.2mm， 反应通道长为0.8～1.2m； 所述的注 射器分别是第一注 射器与第二注射器， 所述的 第一连接管道为Y型或T型管道， 所述的第一注射器与第二注注射器分别连接在所述的Y型 或T型管道的两个接口并通过 所述的Y型或T型 管道与所述的反应通道串联； 所述方法为： 式(I)所示腺嘌呤和式(II)所示丙烯酸酯类化合物分别用DMF溶解后， 得 到浓度为0.2mmol/mL～0.8mmol/mL的式(I)所示腺嘌呤溶液和浓度为0.5～2.5mmol/mL的 式(II)所示丙烯 酸酯类化合物溶液； 将所述式(I)所示腺嘌 呤溶液、 式(II)所示丙烯 酸酯类 化合物溶液分别装于所述第一注射器与第二注射器中， 并将所述的第一注射器、 第二注射 器装于同一注 射泵中； 将 脂肪酶Lipoz yme RM IM均匀填充在微流控通道反应器的反应通道 中后， 在注射泵的同步推动下， 使所述式(I)所示腺嘌呤溶液、 式(II)所示丙烯酸酯类化合 物溶液连续同步通入反应通道中进行迈克尔加成反应， 控制反应温度为30～55℃， 反应液 在反应通道 内连续流动的反应时间为10～60min， 通过产物收集器在线收集流出反应通道 的反应液， 所述反应液经后处理， 得到式(III)所示腺嘌 呤迈克尔加成衍生物； 所述式(I)所 示腺嘌呤溶液与式(II)所示丙烯 酸酯类化合物溶液的浓度之比为 1： 1～5； 在所述反应通道 可容纳所填充催化剂的最大限度内， 催化剂的加入量以反应溶剂的体积计为0.03g/mL～ 0.06g/mL。 10.如权利要求1～9任一项所述的在线合成腺嘌呤迈克尔加成衍生物的方法， 其特征 在于： 所述后处理为： 将所述反应液减压蒸除溶剂后， 以体积比为 1:30的乙酸乙酯和二氯甲 烷的混合溶液为洗脱剂进行硅胶柱层析， 收集含目标化合物的洗脱液， 蒸干， 得到式(III) 所示腺嘌呤迈克尔加成衍 生物。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115478086 A 3