(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111320847.4 (22)申请日 2021.11.09 (71)申请人 启东启晨生物科技有限公司 地址 226200 江苏省南 通市启东经济开发 区林洋路5 00号 (72)发明人 张志祥　彭程　吴江　 (74)专利代理 机构 南通锦惠知识产权代理事务 所(普通合伙) 32384 代理人 钱靓 (51)Int.Cl. A61K 47/54(2017.01) A61K 47/68(2017.01) A61K 31/136(2006.01) A61K 31/555(2006.01) A61K 31/704(2006.01)A61K 33/243(2019.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种DNA作为药物载体的抗体偶联物抗肿瘤 药物 (57)摘要 本发明公开了一种DNA作为药物载体的抗体 偶联物抗肿瘤药物， 结构 包含抗体通过交联剂链 接DNA， 嵌入剂(如蒽环类分子)通过嵌入碱基对 之间链接DNA， 铂类分子通过配位键链接到DNA 碱 基上， 这一抗体偶联物可以用作一类抗体靶向肿 瘤药物， 一方面发挥了抗体的靶向作用， 另 一方 面发挥了DNA高荷载量以及减 轻抗癌药物对其它 正常组织和器官的毒性。 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 CN 113975399 A 2022.01.28 CN 113975399 A 1.一种DNA作为药物载体的抗体偶联物抗肿瘤药物， 其特征在于： 该抗肿瘤药物为DNA 作为药物载体并插入嵌入剂和/或铂类药物分子的抗体偶联物抗肿瘤药物， 该抗肿瘤药物 为抗体‑DNA‑小分子复合物， 抗体 ‑DNA‑小分子复合物为抗体 ‑DNA‑抗肿瘤药物复合物或者 抗体‑DNA‑核酸染料分子复合物。 2.根据权利要求1所述一种DNA作为药物载体的抗体偶联物抗肿瘤药物， 其特征在于： 嵌入剂分子为阿霉素、 米托 蒽醌以及 双功能的蒽环类分子 。 3.根据权利要求1所述一种DNA作为药物载体的抗体偶联物抗肿瘤药物， 其特征在于： 铂类药物分子是奥沙利铂、 顺铂、 卡铂。 4.根据权利要求1所述一种DNA作为药物载体的抗体偶联物抗肿瘤药物， 其特征在于： DNA为线性、 环状或者 立体结构的。 5.根据权利要求2所述一种DNA作为药物载体的抗体偶联物抗肿瘤药物， 其特征在于： 将抗体‑DNA偶联技术与DNA ‑小分子复合物技术结合起来制备抗体 ‑DNA‑小分子复合物， 即 抗体与DNA通过偶联剂共价连接， 铂类药物分子单独链接DNA或者联合 蒽环类分子链接DNA。 6.根据权利要求5所述一种DNA作为药物载体的抗体偶联物抗肿瘤药物， 其特征在于： 抗体‑DNA‑小分子复合物的制备方法为： 将抗体在缓冲液中溶解或者稀释， 根据抗体的浓 度， 加入偶联剂， 抗体与偶联剂的摩尔比为 1:5， 进行偶联反应的第一步， 偶联结束后用缓冲 液去盐， 获得活化的抗体， 活化的抗体保存在4～8℃冰箱中， 然后将活化的抗体与DNA分子 进行偶联反应， 制备得到抗体DNA偶联物， 抗体DNA偶联物储存在保存 溶液中备用； 小分子在 DNA与抗体进行偶联反应之前或之后、 或者在使用时加入， 获得抗体 ‑DNA‑小分子三组分复 合物。 7.根据权利要求5所述一种DNA作为药物载体的抗体偶联物抗肿瘤药物， 其特征在于： 抗体‑DNA‑小分子复合物的制备方法为： 将DNA或者寡聚核苷酸在缓冲液中溶解或者稀释， 根据寡聚核苷酸的浓度， 加入偶联剂， 寡聚核苷酸与偶联剂的摩尔比为1:5； 进行偶联反应 的第一步， 偶联结束后用缓冲液去盐， 获得活化的寡聚核苷 酸， 然后将活化的寡聚核苷酸与 抗体进行偶联反应， 制备得到抗体DNA偶联物， 抗体DNA偶联物储存在保存 溶液中备用； 小分 子在DNA与抗体进行偶联反应之前或之后、 或者在使用时加入， 获得抗体 ‑DNA‑小分子三组 分复合物。 8.根据权利要求6或7所述一种DNA作为药物载体的抗体偶联物抗肿瘤药物， 其特征在 于： 所述缓冲液为去盐柱。 9.根据权利要求6或7所述一种DNA作为药物载体的抗体偶联物抗肿瘤药物， 其特征在 于： 所述小分子为 抗肿瘤药物或者具有抗肿瘤作用的核酸染料分子 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113975399 A 2一种DNA作 为药物载体的抗体偶联物抗肿瘤药物 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技术领域， 特别是一种DNA作为药物载体 的抗体偶联物抗肿 瘤药物。 背景技术 [0002]很长时期以来， 各种抗体偶联物在科学研究和医疗制 药领域有着广泛的应用， 比 如各种带有标记的抗体， 用于细胞标记， 在免疫细胞组化、 流式细胞术等领域， 有着广泛的 应用； 另一方面抗体 ‑药物的偶联物制成的抗体药物复合物(ADC)， 在肿瘤治疗领域得到了 越来越多的应用， 成为肿瘤治疗的一个新兴方向(Drago,J.Z.,Modi,S.,&Ch andarlapaty, S.(2021).Unlocking  the potential  of antibody ‑drug conjugates  for cancer  therapy.Nature  Reviews.Cl inical Oncology,18(6),327 –344.)。 [0003]另一方面， D NA具有高载荷特征， D NA除了是生物遗传信息的载体之外， 研究人员也 开发了DNA作为结构物质， 用于载荷小分子， 比如抗癌药物， 靶向到肿瘤部位(Li,S.,Jiang, Q.,Liu,S.,Zhang,Y.,Tian,Y.,Song,C.,Wang,J.,Zou,Y.,Anderson,G.J.,Han,J. ‑Y., Chang,Y.,Liu,Y.,Zhang,C.,Chen,L.,Zhou,G.,Nie,G.,Yan,H.,Ding,B.,&Zhao,Y. (2018).A  DNA nanorobot  functions  as a cancer therapeutic  in response  to a  molecular  trigger in vivo.Nature  Biotechnology,36(3),258 –264.https://doi.org/ 10.1038/nbt.4071)。 自从1970年代开始， 研究人员就研究开发DNA ‑阿霉素复合物， 用以降 低阿霉素对其它器官的非特异性伤害， 减轻阿霉素的毒性。 这种DNA ‑阿霉素复合物中的DNA 包括鲱鱼精子DNA、 纯化的线性/环形DNA以及三维立体结构的DNA折 纸。 [0004]一些研究人员制备了抗体D NA偶联物， 并且将之用作载荷药物分子， 靶向肿瘤细胞 (Hsu,N.S.,Lee,C.C.,Kuo,W.C.,Chang,Y.W.,Lo,S.Y.,&Wang,A.H.J.(2020).Development   of a Versatile  and Modular Linker for Antibody ‑Drug Conjugates  Based on  Oligonucleotide  Strand Pairing.Bioconjugate  Chemistry,31(7) ,1804 – 1811.https://doi.org/10.1021/acs.bioconjchem.0c00281)， 这种抗体DNA偶联物是用偶 联剂将药物小分子与DNA直接共价结合在一起的， 存在药物荷载量受到限制， 需要对DNA进 行特别修饰的问题。 [0005]抗体DNA偶联物， 将之用作载荷药物分子给药后， 配方包含三种主要循环成分： 抗 体DNA偶联物(占绝大多 数)、 未偶联的抗体和游离的小分子药物 等各种成分的混合物。 这几 个组成部 分的相对比例可能在不同情况下有 所不同， 抗体DNA偶联物的比例， 部 分取决于连 接体的稳定性和产品纯度， 并可能在给药后几天内随时间变化。 例如， 跟踪T ‑DM1各成分的 临床药代动力学研 究研究表 明， 总trastuzumab(偶联抗体加未偶联抗体)的血清峰值浓度 比完整T‑DM1结合物的血清峰值浓度高出约20％， 而DM1有效载荷的浓度则低几个数量级， 几乎无法通过分析检测到(Drago,J.Z.,Modi,S.,&Chandarlapaty,S.(2021).Unlocking   the potential  of antibody ‑drug conjugates  for cancer therapy.Nature   Reviews.Cl inical Oncology,18(6),327 –344.)。说　明　书 1/6 页 3 CN 113975399 A 3