(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111424966.4 (22)申请日 2021.11.26 (71)申请人 山东大学齐鲁医院 地址 250014 山东省济南市历下区文化西 路107号 (72)发明人 王庆杰　傅相蕾　林贵梅　 (74)专利代理 机构 济南圣达知识产权代理有限 公司 372 21 代理人 李筝 (51)Int.Cl. A61K 47/60(2017.01) A61K 47/69(2017.01) A61K 45/06(2006.01) A61K 31/555(2006.01) A61K 33/24(2019.01)A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) C07F 15/00(2006.01) (54)发明名称 一种pH敏感脂质体及其制备方法与应用 (57)摘要 本发明涉及生物医药技术领域， 具体涉及一 种pH敏感脂质体及其制备方法与应用。 所述pH敏 感脂质体由以下物质的量的药物和脂质体载体 组成： 摩尔比为(2～5)： (0.5～1.5)： (0.5～ 1.5)： (0.1～0.3)的(2,3 ‑二油酰基 ‑丙基)‑三甲 基铵‑氯盐： 二油酰磷脂酰胆碱： 胆固醇琥珀酸单 酯： DSPE‑PEGn‑pep； ICD诱导剂与(2,3 ‑二油酰 基‑丙基)‑三甲基铵 ‑氯盐、 二油酰磷脂酰胆碱和 胆固醇琥珀酸单酯的总质量比为(5～12)： 100； 腺苷通路阻断剂与ICD诱导剂的质量比为(0.5～ 2)： (0.5～ 3)。 ICD诱导剂和腺苷通 路抑制剂两 药 连用克服了仅使用ICD诱导剂 治疗的抗肿瘤疗效 差、 肿瘤免疫逃避的问题， 利用脂质体载体实现 ICD诱导剂和腺苷通路抑制剂的体内共同递送； POL的pH敏感特性有效保证POL在血液循环过程 中保持稳定 。 权利要求书2页 说明书8页 附图7页 CN 114099698 A 2022.03.01 CN 114099698 A 1.一种pH敏感脂质体， 其特征在于， 所述pH敏感脂质体由以下药物和脂质体载体组成： (2,3‑二油酰基 ‑丙基)‑三甲基铵 ‑氯盐， 二油酰磷脂酰胆碱， 胆固醇琥珀酸单酯， DSPE ‑ PEGn‑pep， ICD诱 导剂和腺苷通路阻断剂。 2.如权利 要求1所述的pH敏感脂质体， 其特征在于， 所述ICD诱导剂包括强心苷、 奥沙利 铂、 蒽环类药物、 米托 蒽醌、 阿霉素、 环磷酰胺和光热剂； 或者， 所述腺苷通路阻断剂包括CD39抑制剂、 CD73抑制剂、 A2aR受体抑制剂在内的小分 子抑制剂和抗体药物； 优选地， 所述CD39抑制剂选择POM ‑1。 3.如权利要求1所述的pH敏感脂质体， 其特征在于， (2,3 ‑二油酰基 ‑丙基)‑三甲基铵 ‑ 氯盐： 二油 酰磷脂酰胆碱： 胆固醇琥珀酸单酯： DSPE ‑PEGn‑pep的摩尔比为(2～5)： (0.5～ 1.5)： (0.5～1.5)： (0.1～0.3)； ICD诱导剂与(2,3 ‑二油酰基 ‑丙基)‑三甲基铵 ‑氯盐、 二油酰磷脂酰胆碱和胆固醇琥珀 酸单酯的三 者总质量的比为(5～12)： 10 0； 腺苷通路阻断剂与ICD诱 导剂的质量比为(0.5～ 2)： (0.5～3)， 优选为1:1。 4.如权利要求1所述的pH敏感脂质体， 其特征在于， DSPE ‑PEGn‑pep中的n＝2000～ 5000； 优选地， n ＝2000,3500,5000， 进一步优选地， n ＝2000。 5.一种权利要求1所述的pH敏感脂质体的制备方法， 其特征在于， 所述制备方法包括如 下步骤： (1)合成ICD诱 导剂前药； (2)制备多肽 ‑PEG‑N‑二硬脂酰磷脂酰乙酰胺DSPE ‑PEGn‑pep： 在PLGLAG水溶液中加入 EDC和NHS， 室温活化羧基， 将氨基 ‑PEG‑N‑二硬脂酰磷脂酰乙酰胺DSPE ‑PEGn‑NH2溶解于DMF 中， 缓慢加入其中， 搅拌 反应后透析 纯化， 冷冻干燥得到最终产物D SPE‑PEGn‑pep； (3)制备ICD诱导剂脂质体： 将(2,3 ‑二油酰基 ‑丙基)‑三甲基铵 ‑氯盐、 二油酰磷脂酰胆 碱、 胆固醇琥珀酸单酯、 ICD诱导剂前药溶解于适量氯仿， 真空旋蒸后形成脂质薄膜， 与 葡萄 糖溶液水合搅拌， 然后强制挤出 得到ICD诱 导剂脂质体混悬 液； (4)制备腺苷通路阻断剂/ICD诱导剂脂质体： 将步骤(3)得到 的ICD诱导剂脂质体混悬 液缓慢滴加到腺苷通路阻断剂溶液中， 室温搅拌， 即得腺苷通路阻断剂/ICD诱导剂脂质体 混悬液； (5)制备POL： 在腺苷通路阻断剂/ICD诱导剂脂质体混悬液中加入DSPE ‑PEGn‑pep， 搅拌、 超滤、 离心 即得。 6.如权利要求5所述的pH敏感脂质体的制备方法， 其特征在于， 步骤(3)中与葡萄糖溶 液水合的温度为3 0‑50℃， 优选40℃； 优选地， 步骤(3)中所述葡萄糖溶液的浓度 为4‑6％； 优选地， 搅拌时间为30 ‑120min， 优 选60min； 优选地， 强制挤出采用2 20nm的聚碳 酸酯膜过 滤器进行。 7.如权利要求5所述的pH敏感脂质体的制备方法， 其特征在于， 步骤(4)中搅拌为室温 下800‑200rpm搅拌10 ‑12min； 或者， 步骤(5)中腺苷通路阻断剂/ICD诱导剂脂质体混悬液与DSPE ‑PEG2000‑pep的摩 尔比为10 0： 1；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114099698 A 2或者， 步骤(5)中40 ‑50℃搅拌反应4‑5h。 8.如权利要求5所述的pH敏感脂质体的制备方法， 其特征在于， 当ICD诱导剂选择奥沙 利铂时， 奥沙利铂前 药OXA‑C的制备方法为： 将奥沙利铂溶解在DMF中， 加入H2O2溶液， 并在室温下反应得到OXA ‑OH； 将OXA‑OH重新溶解于DMF中， 加入十六烷基异氰酸酯， 黑暗条件下反应24 ‑72h； 加入饱 和食盐水出现白色沉淀混合物， 使用乙酸乙酯萃取后， 真空浓缩混合物， 真空干燥； 通过凝 胶柱层层析的方法获得最终白色粉末OXA ‑C。 9.一种权利要求1所述的pH敏感脂质体或者权利要求5所述的制备方法制备得到的pH 敏感脂质体在制备靶向抗肿瘤药物中的应用。 10.如权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤选自黑色素瘤、 肠癌、 肺癌、 胃癌、 卵巢癌、 前列腺癌、 胰腺癌、 乳 腺癌、 卵巢癌、 肝癌、 头颈部癌、 淋巴瘤、 肉瘤、 慢 性淋巴细胞白 血病、 甲状腺癌和睾丸癌和肛门癌。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114099698 A 3