(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111326144.2 (22)申请日 2021.11.10 (71)申请人 西北农林科技大 学 地址 712100 陕西省咸阳市杨凌示范区 邰 城路3号 (72)发明人 曹蔚　李泽之　肖芊含　刘文娟　 (74)专利代理 机构 西安正华恒远知识产权代理 事务所(普通 合伙) 61271 代理人 傅晓 (51)Int.Cl. C08B 37/00(2006.01) A61K 31/715(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种中药蛴螬脂多糖及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种中药蛴螬脂多糖及其制 备方法和应用， 该中药蛴螬脂多糖分子量为5～ 6.5kDa， 本发明将蛴螬粉碎后， 通过脱脂、 提取、 沉降、 除蛋白、 除色素、 分离及纯化得分子量为5 ～6.5kDa的组分， 再浓缩干燥得中药蛴螬脂多 糖。 本发明提供的中药蛴螬脂多糖与Gal ‑1有较 强的特异性亲和， 对Gal ‑1有很好的抑制活性， 可 以作为Gal ‑1抑制剂， 对癌症特别是抗VEGF靶向 药难治性肿瘤、 眼部血管增生性疾病具有预防或 治疗作用。 权利要求书2页 说明书11页 CN 113980148 A 2022.01.28 CN 113980148 A 1.一种中药蛴螬脂多糖， 其特征在于， 所述中药蛴螬脂多糖分子量为5～6.5kDa， 其结 构组成包括单糖残基和脂肪酸链； 所述中药蛴螬脂多糖的单糖残基类别及各类摩尔比为阿拉伯糖： 葡萄糖： 甘露糖： 半乳 糖： 鼠李糖： 葡糖胺： 半乳糖醛酸： 葡萄糖醛酸＝8.23～25.79： 6.98～24.97： 3.35～13.84： 2.67～11.43： 1.97～7.48： 1.01～5.78： 0.87～3.85： 1.0 0； 所述单糖残基结构组成及其摩尔比为端基 ‑呋喃型阿拉伯糖： 端基 ‑吡喃型葡萄糖： 1, 6‑吡喃型葡萄糖： 1,4 ‑吡喃型半乳糖： 1,6 ‑吡喃型甘露糖： 1,2 ‑吡喃型鼠李糖： 1,6 ‑吡喃型 葡萄糖胺： 1,2 ‑吡喃型甘露糖： 1,6 ‑吡喃型半乳糖醛酸： 1,3 ‑吡喃型葡萄糖醛酸＝8.24～ 20.34： 4.19～12.45： 2.98～11.23： 5.23～9.03： 2.01～6.67： 2.24～6.23： 1.89～5.41： 1.78～5.12： 1.01～3.6 5： 1.00； 所述脂肪酸链水解后组成为十六烷酸、 十八烷酸、 戊酸、 5 ‑羟基‑2‑己酮、 2‑己醇‑5‑甲 氧基乙酸酯、 3 ‑甲氨基‑1,2‑丙二醇、 5 ‑甲基‑3‑(甲基氨基) ‑2‑己酮和3‑叔丁基苯酚。 2.根据权利要求1所述的中药蛴螬脂多糖的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)脱脂： 将中药蛴螬粉碎后， 用有机溶剂脱脂， 得脱脂药粉； (2)提取： 用提取剂对脱脂药粉进行回流 提取， 得提取浓 缩液； (3)沉降： 将提取浓 缩液进行沉降除杂后， 得多糖混合物。 (4)除蛋白： 采用Sevage法、 三氟三 氯乙烷法、 三氯醋酸法、 反复冻融法和柱层 析法中的 至少一种除去 多糖混合物中的蛋白质， 得脱蛋白多糖混合物； (5)除色素： 采用双氧水法、 大孔吸附树脂法、 活性碳法和离子交换柱层析法中的至少 一种除去 脱蛋白多糖混合物中的色素， 得总多糖溶 液； (6)分离及纯化： 将总多糖溶液加样至DEAE ‑sephadex  A‑25柱， 用水洗脱至苯酚 ‑硫酸 法显色无黄色出现， 弃去水洗脱多糖组分； 用0.3～1M  NaCl溶液洗脱至苯酚 ‑硫酸法显色无 黄色出现， 收集洗脱液并浓缩； 将浓缩液离心后， 加样至Sephadex  G‑100或Sephacryl  G‑75 凝胶柱， 用洗脱剂洗脱， 收集分子量为5～6.5kDa的组分， 再经浓缩干燥， 即得所述中药蛴螬 脂多糖。 3.根据权利要求2所述的中药蛴螬脂多糖的制备方法， 其特征在于： 步骤(1)所述有机 溶剂为甲醇、 乙醇、 乙醚、 石油醚、 苯、 氯仿、 二氯甲烷 或乙酸乙酯； 脱脂方法为回流、 浸渍、 索 氏提取器提取和渗 漉法中的至少一种。 4.根据权利要求2所述的中药蛴螬脂多糖的制备方法， 其特征在于： 步骤(2)中所述提 取剂为水或浓度为0.0 5～0.2mo l/L的氢氧化钠溶 液。 5.根据权利要求2所述的中药蛴螬脂多糖的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)回流提取 包括以下步骤： S1： 将脱脂药粉与氢氧化钠 溶液按1:2～12的质量比混合， 于80～100℃下 回流2～4次， 每次2～6h； S2： 合并提取 液， 并减压浓 缩至原体积的1/2 ～1/50， 得提取浓 缩液。 6.根据权利要求2所述的中药蛴螬脂多糖的制备方法， 其特征在于， 步骤(3)沉降包括 以下步骤： 将提取浓缩液于4℃预冷6～24h， 再加入2～5倍体积的无水乙醇， 静置过夜后离 心， 收集沉淀， 得多糖混合物。 7.根据权利要求2所述的中药蛴螬脂多糖的制备方法， 其特征在于， 步骤(5)中双氧水权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 113980148 A 2法脱色过程为： 将脱蛋白多糖混合物和30％过氧化氢溶液按1:0.5～3的体积比混匀， 于50 ～80℃回流1～5 h。 8.根据权利要求2所述的中药蛴螬脂多糖的制备方法， 其特征在于， 步骤(6)中所述洗 脱剂为水或浓度为0.1M的NaCl溶 液。 9.如权利要求1所述的中药蛴螬脂多糖在制备含半乳凝集素 ‑1抑制剂的药物中的应 用。 10.如权利要求1所述的中药蛴螬脂多糖在制备预防和/或治疗癌症特别是抗VEGF靶向 药难治性肿瘤或眼部血 管增生性疾病药物中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 113980148 A 3