(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111337758.0 (22)申请日 2021.11.11 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113968893 A (43)申请公布日 2022.01.25 (73)专利权人 兰州大学 地址 730000 甘肃省兰州市城关区天水南 路222号 (72)发明人 高坤　杨红英　陈建军　 (74)专利代理 机构 北京轻创知识产权代理有限 公司 11212 专利代理师 朱广 (51)Int.Cl. C07J 17/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01)审查员 曾雪怡 (54)发明名称 一种具有抗血管生成活性的强心苷及其制 备方法和应用 (57)摘要 本发明涉及生物 化工用技术领域， 具体涉及 一种具有抗血管生成活性的强心苷及其制备方 法和应用。 一种具有抗血管生 成活性的强心苷是 从毛花洋地黄叶子中提取并分离得到的化合物， 该化合物对非小细胞肺癌细胞A 549,宫颈癌细胞 Hela,乳腺癌细胞MCF ‑7具有纳摩尔浓度级 的增 殖抑制活性； 另外该化合物能在鸡胚绒毛尿囊膜 模型上显著抑制新血管生 成， 因此可为开发新型 抗肿瘤血 管生成药物提供候选药物。 权利要求书1页 说明书4页 附图4页 CN 113968893 B 2022.11.22 CN 113968893 B 1.一种具有抗血管生成活性的强心苷的  制备方法， 其中， 具有抗血管生成活性的强心 苷是从毛花洋地黄叶子中提取并分离得到的化合物digitoxigenin3 ‑O‑β‑D‑ glucopyranosyl ‑(1→4)‑β‑D‑methylglucopyranosyl ‑(1→4)‑β‑D‑digitoxopyranosyl ‑ (1→4)‑β‑D‑digitoxopyran oside， 所述 化合物的结构式如下： 包括以下步骤： S1、 将毛花洋地黄干燥叶子用甲醇浸泡3次， 每次7天， 甲醇浸提液减压浓缩得到总浸 膏； S2、 将步骤S1所得总浸膏分别用石油 醚， 乙酸乙酯， 正丁醇进行萃取， 其中乙酸乙酯段 用大孔树脂进行色谱分离， 分离时依次采用乙醇 ‑水从0:100,30:70,50:50,80:2 0,95:5v/v 梯度洗脱， 收集梯度为乙醇： 水＝80:20的洗脱组分； S3、 将步骤S2所得的洗脱 组分再用MCI柱色谱进行分离， 分离时依次采用甲醇 ‑水从50: 50， 60:40,70:30,80:2 0,90:10,100:0v/v梯度洗脱， 收集80:2 0组分并用硅胶 柱色谱进行分 离； 以流动相为二氯甲烷/甲醇的混合溶剂梯度洗脱， 体积比从40:1到1:1， 收集梯度为20:1 至10:1的二氯甲烷/甲醇洗脱组分， 以二氯甲烷： 甲醇＝8:1为展开剂进行薄层色谱分析， 该 组分Rf值为0.5‑0.8， 紫外波长254nm下有吸收， TLC板上喷洒3， 5 ‑二硝基苯甲酸试剂并加 热， 显色为 紫红色； S4、 将步骤S3所得的组分用凝胶柱色谱进行分离， 洗脱液为体积比1:1的二氯甲烷 ‑甲 醇溶液， 收集TLC 板上经喷洒3， 5 ‑二硝基苯甲酸试剂并加热后显色为 紫红色的组分； S5、 将步骤S4所得的组分采用半制备液相色谱进行纯化， 流动相为体积比为23:17的甲 醇/水， 流速为2mL/min， 检测波长为200 ‑400nm， 接收保留时间为34min,紫外吸收特征波长 为215nm的组分 即得到所述 化合物。 2.根据权利要求1所述的一种具有抗血管生成活性的强心苷制备方法， 其特征在于： 所 述步骤S5中分离过程时半制备液相色谱的液相色谱仪为Waters1525， 流动相为甲醇 ‑水， 流 速为2mL/min， 检测器为Waters  2998光电二极管阵列检测器， 色谱柱为Waters  Sunfire  C18半制备柱， 规格为10 ×150mm。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113968893 B 2一种具有抗血 管生成活性的强心苷及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物化工用技术领域， 具体涉及一种具有抗血管生成活性的强心苷及 其制备方法和应用。 背景技术 [0002]肿瘤是严重威胁人类健康和生命的常见疾病， 全球癌症发病率和死亡率正在呈迅 速上升的趋势， 已成为21世纪世界各国人类死亡的首要原因和人寿命延长的最主要的障 碍。 为了降低肿瘤的发病率和死亡率， 各国研究人员都在为之进 行不懈努力。 尽管人类在肿 瘤方面取 得了长足的进步， 但是肿瘤的治疗仍然是一个有 待攻克的难题。 [0003]肿瘤的生长依赖于血管生成， 肿瘤血管生成在恶性肿瘤的生长、 侵袭和转移等过 程中发挥了极其重要的作用， 也被认为是癌症的主要特征之一。 以肿瘤的新生血管为作用 靶点， 通过切断对肿瘤的营养供应和转移路径， 阻止肿瘤的生长、 侵袭和转移， 是一种重要 的靶向治疗方法。 肿瘤血管靶向药与传统的抗肿瘤药相比， 具有毒性小、 不易产生耐药性以 及具有防止肿瘤的转移 等诸多优点。 抑制肿瘤血管生成已成为国际上一个很有潜力的研究 热点。 [0004]强心苷是自然界中存在的一类能够增强心肌收缩作用的甾体苷类化合物， 近些年 的研究表明其具有抗癌作用， 因此对富含强心苷成分的药用植物毛花洋地黄(Digitalis   lanata)的进行研究， 有望从中获得 结构新颖活性优良的化 合物。 [0005]为此， 我们提出一种具有抗血 管生成活性的强心 苷及其制备 方法和应用。 发明内容 [0006]本发明的目的在于提出了一种结构新颖的具有抗血管生成活性的强心苷及其制 备方法和应用。 [0007]为实现上述目的， 本发明提供如下技 术方案： [0008]一种具有抗血管生成活性的强心苷是从毛花洋地黄(Digitalis  lanata)叶子中 提取并分离得到的化合物digitoxigenin3 ‑O‑β‑D‑glucopyranosyl ‑(1→4)‑β‑D‑ methylglucopyranosyl ‑(1→4)‑β‑D‑digitoxopyranosyl ‑(1→4)‑β‑D‑ digitoxopyran oside； 所述 化合物的结构式如下 [0009] [0010]所述一种具有抗血 管生成活性的强心 苷的制备 方法包括以下步骤：说　明　书 1/4 页 3 CN 113968893 B 3