(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111404182.5 (22)申请日 2021.11.24 (71)申请人 北京化工大 学 地址 100029 北京市朝阳区北三环东路15 号 (72)发明人 胡高飞　马景晶　李梁雨　汪乐余　 (74)专利代理 机构 重庆市信立达专利代理事务 所(普通合伙) 50230 代理人 朱月明 (51)Int.Cl. A61K 38/44(2006.01) A61K 31/704(2006.01) A61K 31/30(2006.01) A61K 9/51(2006.01) A61K 47/34(2017.01)A61K 47/18(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 49/12(2006.01) A61K 49/18(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) B82Y 30/00(2011.01) B82Y 15/00(2011.01) G01N 21/31(2006.01) G01N 21/78(2006.01) G01N 21/64(2006.01) G01N 24/08(2006.01) (54)发明名称 一种多功能诊疗一体化纳米复合探针及其 制备方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种多功能诊疗一体化纳米 复合探针及其制备方法和应用， 该纳米复合探针 将阿霉素(DOX)和19F信号源全氟 ‑15‑冠‑5‑醚 (PFCE)通过疏水 ‑疏水相互作用与赖氨酸铜和油 胺 共 修 饰 的 聚 琥 珀 酰 亚 胺 两 亲 高 分 子 (PSILys‑Cu‑Lys/OAm)进行组装， 再通过聚赖氨酸 (PLL)调节静电作用吸附葡萄糖氧化酶(GOx)， 进 而成功构建了多功能纳米复合体系DFPPG。 本发 明提供的纳米复合探针DFPPG在100μg/mL时， 对 4T1细胞具有78％的抑制率， 相比于其他对照组 具有最优的抗癌活性； 且小鼠活体肿瘤部位19F 磁共振成像信号在数小时内呈现高对比度影像 并在24h后有明显减弱的现象， 表明探针具有优 良的肿瘤成像示踪性能和适宜的体内代谢行为， 具有良好 生物相容 性。 权利要求书2页 说明书5页 附图4页 CN 114146166 A 2022.03.08 CN 114146166 A 1.一种多功能诊疗一体化纳米复合探针， 其特征在于： 包括利用阿霉素和19F信号源全 氟‑15‑冠‑5‑醚通过疏水 ‑疏水相互作用与赖氨酸铜和油胺共修饰的聚琥珀酰亚胺两亲高 分子进行组装， 再通过聚赖氨酸调节静电作用吸附葡萄糖氧化酶， 构建纳米复合体系。 2.根据权利要求1所述的一种 多功能诊疗一体化纳米复合探针， 其特征在于： 所述的纳 米复合探针是 粒径为157.20 ±50nm的颗粒。 3.根据权利要求1所述的一种 多功能诊疗一体化纳米复合探针， 其特征在于： 所述的纳 米复合探针的溶 液的浓度为 400 μg/mL至40 00 μg/mL。 4.一种多功能诊疗一体化纳米复合探针的制备 方法， 其特 征在于： 包括以下步骤： 步骤一： 赖氨酸铜配合物的制备： 在40mL超纯水中通过超声溶解0.04mol的L ‑赖氨酸盐 酸盐， 待溶液至澄清透明后将准确称取的10mmol碱式碳酸铜， 在60℃水浴条件 下缓慢加入， 溶液逐渐变为蓝色， 在650rpm条件下搅拌2h； 反应结束后趁热过滤， 取得深蓝色澄清滤液； 将过滤后的溶液通过减压蒸馏除去部分水分， 直至瓶壁出现蓝色固体析出迹象， 停止操作 静置一段时间； 待瓶中固体大量析出后， 将其转移至布氏漏斗中抽滤， 多次用乙醇洗涤滤 饼， 得到蓝色固体产物Lys ‑Cu‑Lys并将其烘干后干燥保存； 步骤二： 赖氨酸铜和油胺共修饰聚琥珀酰亚胺高分子的制备方法： 配制A液： 称取1.5g   PSI放入100mL圆底烧瓶中， 用量筒量取28mL  DMF加入烧瓶； 配制B液： 称取1.2g先前合成的 Lys‑Cu‑Lys， 并通过超声溶解于12mL水中； 搅拌升温至A液澄清， 随后快速加入B液， 在90℃ 条件下反应5h； 反应完毕后静置冷却， 待产物析出， 用丙酮离心洗涤数次， 弃去上清除去水 分， 真空干燥除去残留丙酮和水， 得到固体产物P SILys‑Cu‑Lys； 与上述反应 条件相似， 将干燥后的PSILys‑Cu‑Lys超声分散在32mL  DMF中， 在 90℃条件下搅 拌均匀后再用移液枪加入2.3mL  OAm， 然后将混合物在100℃， 650rpm/min搅拌5h； 反应完毕 后冷却至室温， 并向反应液中加入 大量甲醇沉淀产物； 9000rpm， 8min离心处理之后， 蒸干多 余的甲醇液体； 向沉淀中加入二氯甲烷溶解， 定量P SILys‑Cu‑Lys/OAm(300mg/mL)储备 液； 步骤三： DOX ·HCl疏水改性： 准确称取20mgDOX ·HCl并与20μL三乙胺一起加入三氯甲 烷中室温搅拌12h， 通过酸碱反应去除盐酸盐； 为了去除未反应的DOX ·HCl， 反应完毕后加 入适量H2O进行萃取 纯化； 静置取 下层氯仿相， 于4℃冰箱中储 存备用(2mg/mL)； 步骤四： DOX/F@PSILys‑Cu‑Lys/OAm(DFP)纳米探针的制备： 将60mgPSILys‑Cu‑Lys/OAm， 0.5mg DOX (疏水)， 10 μL  PFCE加入二氯甲烷中并定容至1mL， 然后将二氯甲烷溶液充分振荡后迅速加 入到10mL  NaOH水溶液(0.5mM)中， 在冰浴条件 下间断超声乳化6min， 得到粉色均一乳液； 将 乳液在每分钟200rpm条件下于室温中搅拌4h， 除去易挥发的二氯甲烷； 待溶液变为澄清的 橙红色溶 液后， 离心15mi n得到纳米探针DOX/F@P SILys‑Cu‑Lys/OAm(DFP)并分散在1mL水中； 步骤五： DOX/F@PSILys‑Cu‑Lys/OAm@PLL‑GOx(DFPPG)的制备： 将制得的DFP和4mg正电高分子 聚合物聚赖氨酸先后加入水中室温搅拌4h， 离心收集包裹PLL的纳米颗粒DOX/F@ PSILys‑Cu‑Lys/OAm@PLL(DFPP)； 负电位GOx通 过静电吸附包裹于纳米颗粒表面， 通 过超声将正电 纳米颗粒均匀分散在水中， 在搅拌条件下加入2mM  GOx水溶液， 并在室温下温和搅拌2h； 反 应完毕后， 先用3,500rpm离心3min去除大颗粒， 随后再用15,000rpm的转速离心收取沉淀， 得到纳米复合探针DOX/F@PSILys‑Cu‑Lys/OAm@PLL‑GOx(DFPPG)； 随后将所得产物分散于1mL水 中， 避光储 存在4℃冰箱中备用。 5.一种多功能诊疗一体化纳米 复合探针的应用， 其特征在于： Lys ‑Cu‑Lys作为CDT催化权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114146166 A 2单元在酸性条件下催化H2O2产生毒性羟基自由基( ·OH)， 杀死肿瘤细胞； 而GOx可以原位催 化消耗葡 萄糖实现肿瘤的饥饿疗法， 同时产生 大量葡萄 糖酸和H2O2， 葡萄糖酸导致更酸性的 肿瘤环境和原位生成更多的H2O2进而有效增强CDT疗效； DOX作为广谱抗癌药， 在pH较低的肿 瘤微环境中释放， 产生 化学治疗作用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114146166 A 3