(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111426401.X (22)申请日 2021.11.27 (71)申请人 河南中医药大学 地址 450046 河南省郑州市郑东 新区金水 东路156号 (72)发明人 孙彦君　冯卫生　赵璇　王俊敏　 李孟　弓建红　关延彬　陈辉　 郝志友　张艳丽　 (74)专利代理 机构 郑州天阳专利事务所(普通 合伙) 41113 代理人 聂孟民 (51)Int.Cl. C07J 17/00(2006.01) A61K 31/58(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 35/02(2006.01) (54)发明名称 一种多氧孕甾烷类化合物 亚乎奴甾G的制备 方法及其应用 (57)摘要 本发明涉及多氧孕甾烷类化合物 亚乎奴甾G 的制备方法及其应用， 可有效解决从亚乎奴中制 备亚乎奴甾G， 实现在制备抗肿瘤药物中的应用 问题。 所述的亚乎奴甾G是从亚乎奴药材中制备 得到， 制备的亚乎奴甾G具有 抗癌活性， 可有效用 于制备抗癌药物， 实现亚乎奴甾G在制备抗癌药 物中的应用， 所述的癌为白血病、 肺癌、 肝癌、 乳 腺癌或结直肠癌等， 本发明原料丰富， 制备方法 简单， 可从亚乎奴中制备出新型的多氧孕甾烷类 化合物亚乎奴甾G， 纯度高， 使用效果好， 开拓了 亚乎奴的新用途和治疗癌症的新药物， 有显著的 经济和社会效益。 权利要求书4页 说明书9页 附图5页 CN 113980085 A 2022.01.28 CN 113980085 A 1.一种多氧孕甾烷类化合物亚乎奴甾G的制备方法， 其特征在于， 所述的亚乎奴甾G是 从亚乎奴药 材中制备 得到， 分子结构式为： 亚乎奴甾G(cis sasteroidG)； 制备方法是： 以亚乎奴莲药材30.5～50.7k g为原料， 以2～5倍原料重量体积、 体积浓度 为95％的乙醇加热回流提取3次， 重量体积是指固体以kg计， 液体L计， 提取温度为92～95 ℃， 每次提取时间为1～1.5小时， 减压回收乙醇， 得浸膏状的乙醇提取物， 乙醇提取物混悬 于4.8～9L的蒸馏水中， 依次以石油醚、 二氯甲烷、 正丁醇萃取3次， 每次4.8～9L， 时间为3～ 5小时， 回收溶剂， 得到石油醚萃取部位、 二氯甲烷萃取部位、 正丁醇萃取部位； 将二氯甲烷 萃取部位经硅胶 柱色谱分离， 依次用体积比为100︰ 0、 100︰ 1、 100︰ 3、 100︰ 5、 100︰ 10、 100︰ 30、 100︰ 50、 1︰ 1、 1︰2的石油醚 ‑丙酮混合溶剂进行梯度洗脱， 每一梯度用6.7～9.3L洗脱液， 流 速为10～15mL/min， 每670～930mL体积为一流份， 收集90个流份， 各个流份经硅胶薄层色谱 检测分析， 用GF254薄层板， 分别以体积比1︰ 1的石油醚 ‑丙酮和体积比10︰ 1的二氯甲烷 ‑甲 醇作为展开剂， 以体积比10︰ 90的硫酸 ‑乙醇溶液作为显色剂， 105℃加热3～5min， 根据薄层 色谱检测结果， 分别合并流份1～30、 流份31～50、 流份51～60、 流份61～70、 流份71～90， 得 到组份Fr.1～Fr.5； 组份Fr.4经MCI柱色谱， 经体积比甲醇 ‑水溶液10︰ 90、 30︰ 70、 40︰ 60、 70︰ 30、 80︰ 20梯度洗脱， 每一梯度用300～500mL洗脱液， 流速为2 0～35mL/h， 每一洗脱梯度为一 流份， 收集5个亚组份Fr.4 ‑1、 Fr.4‑2、 Fr.4‑3、 Fr.4‑4、 Fr.4‑5； 亚组份 Fr.4‑4经硅胶柱色谱 分离， 依次用体积比为10︰ 1、 8︰ 1、 5︰ 1、 3︰ 1、 2︰ 1、 1︰ 1、 1︰2的石油醚 ‑乙酸乙酯混合溶剂进行 梯度洗脱， 每一梯度用24mL～40mL洗脱液， 流速为2～5mL/min， 每24～40mL体积为一流份， 收集7个流份， 各个流份经硅胶薄层色谱检测分析， 用GF254薄层板， 分别以体积比1︰ 1的石 油醚‑丙酮和体积比10︰ 1的二氯甲烷 ‑甲醇作为展开剂， 以体积比10︰ 90的硫酸 ‑乙醇溶液作 为显色剂， 105℃加热3～5min， 根据薄层色谱检测结果， 分别 合并流份1～2、 流份3、 流份4、 流份5～7， 得到组份Fr.4 ‑4‑1～Fr.4‑4‑4； 将组份 Fr.4‑4‑4经Sepha dex LH‑20凝胶柱色谱， 甲醇洗脱， 流速为10～15mL/h， 每10～17mL为一流份、 收集20个流份， 各个流份经硅胶薄层 色谱检测分析， 用GF254薄层板， 以体积比7︰ 1的二氯甲烷 ‑甲醇作为展开剂， 以体积比10︰ 90 的硫酸‑乙醇溶液作为显色剂， 105℃加热3～5min， 根据薄层色谱检测结果， 分别合并流份3 ～5、 流份6～17、 流份18～2 0， 得到3个亚组份Fr.4 ‑4‑4‑1、 Fr.4‑4‑4‑2、 Fr.4‑4‑4‑3； 将亚组 份Fr.4‑4‑4‑2经制备型高效液相色谱纯化， 以体积比为60︰ 40的乙腈 ‑水混合溶剂洗脱， 色 谱柱为YMC ‑Pack ODS‑A， 流速为6mL/min， 收集保留时间为48min的色谱峰， 回收溶剂， 即得 亚乎奴甾G。 2.根据权利要求1所述的多氧孕甾烷类化合物亚乎奴甾G的制备方法， 其特征在于， 以 亚乎奴莲药材50.7kg为原料， 以180L、 体积浓度为95％的乙醇加热回流提取3次， 提取温度 为95℃， 每次提取时间为1.5小时， 减压回收 乙醇， 得浸膏状的乙醇提取物， 乙醇提取物混悬权　利　要　求　书 1/4 页 2 CN 113980085 A 2于9L的蒸馏水中， 依次以石油醚、 二氯甲烷、 正丁醇萃取3次， 每次9L， 时间为5小 时， 回收溶 剂， 得到石油醚萃取部位、 二氯甲烷萃取部位、 正丁醇萃取部位； 将二氯甲烷萃取部位经硅 胶柱色谱分离， 依次用体积比为100︰ 0、 100︰ 1、 100︰ 3、 100︰ 5、 100︰ 10、 100︰ 30、 100︰ 50、 1︰ 1、 1︰2的石油醚 ‑丙酮混合溶剂进行梯度洗脱， 每一梯度用9.3L洗脱液， 流速为15mL/min， 每 930mL体积为一流份， 收集90个流份， 各个流份经硅胶薄层色谱检测分析， 用GF254薄层板， 分别以体积比1︰ 1的石油醚 ‑丙酮和体积比10︰ 1的二氯甲烷 ‑甲醇作为展开剂， 以体积比10︰ 90的硫酸 ‑乙醇溶液作为显色剂， 105℃加热3～5min， 根据薄层色谱检测结果， 分别合并流 份1～30、 流份31～50、 流份51～60、 流份61～70、 流份71～90， 得到组份Fr.1～Fr.5； 组份 Fr.4经MCI柱色谱， 经体积比甲醇 ‑水溶液10︰ 90、 30︰ 70、 40︰ 60、 70︰ 30、 80︰ 2 0梯度洗脱， 每一 梯度用500mL洗脱液， 流速为35mL/h， 每一洗脱梯度为一流份， 收集5个亚组份Fr.4 ‑1、 Fr.4‑ 2、 Fr.4‑3、 Fr.4‑4、 Fr.4‑5； 亚组份Fr.4 ‑4经硅胶柱色谱分离， 依次用体积比为10︰ 1、 8︰ 1、 5︰ 1、 3︰ 1、 2︰ 1、 1︰ 1、 1︰2的石油醚 ‑乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱， 每一梯度用40mL洗脱液， 流速为5mL/min， 每40mL体积为一流份， 收集7个流份， 各个流份经硅胶薄层色谱检测分析， 用GF254薄层板， 分别以体积比1︰ 1的石油醚 ‑丙酮和体积比10︰ 1的二氯甲烷 ‑甲醇作为展开 剂， 以体积比10︰ 90的硫酸 ‑乙醇溶液作为显色剂， 105℃加热3～5min， 根据薄层色谱检测结 果， 分别合并流份1～2、 流份3、 流份4、 流份5～7， 得到组份Fr.4 ‑4‑1～Fr.4‑4‑4； 将组份 Fr.4‑4‑4经Sephadex LH‑20凝胶柱色谱， 甲醇洗脱， 流速为15mL/h， 每17mL为一流份、 收集 20个流份， 各个流份经硅胶薄层色谱检测分析， 用GF254薄层板， 以体积比7︰ 1的二氯甲烷 ‑ 甲醇作为展开剂， 以体积比10︰ 90的硫酸 ‑乙醇溶液作为显色剂， 105℃加热3～5min， 根据薄 层色谱检测结果， 分别合并流份3～5、 流份6～17、 流份18～20， 得到3个亚组份Fr.4 ‑4‑4‑1、 Fr.4‑4‑4‑2、 Fr.4‑4‑4‑3； 将亚组份Fr.4 ‑4‑4‑2经制备型高效液相色谱纯化， 以体积比为 60︰ 40的乙腈 ‑水混合溶剂洗脱， 色谱柱为YMC ‑Pack ODS‑A， 流速为6mL/min， 收集保留时间 为48min的色谱峰， 回收溶剂， 即得亚乎奴甾G。 3.根据权利要求1所述的多氧孕甾烷类化合物亚乎奴甾G的制备方法， 其特征在于， 以 亚乎奴莲药材30.5kg为原料， 以91L、 体积浓度为95％的乙醇加热回流提取3次， 提取温度为 92℃， 每次提取时间为1小 时， 减压回收乙醇， 得浸膏状的乙醇提取物1.6kg， 乙醇提取物混 悬于4.8L的蒸馏水中， 依次以石油醚、 二氯甲烷、 正丁醇萃取3次， 每次4.8L， 时间为3小时， 回收溶剂， 得到石油醚萃取部位、 二氯甲烷萃取部位、 正丁醇萃取部位； 将二氯甲烷萃取部 位经硅胶柱色谱分离， 依次用体积比为100︰0、 100︰