(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111282379.6 (22)申请日 2021.11.01 (71)申请人 达石药业 （广东） 有限公司 地址 528400 广东省中山市翠亨新区临海 工业园翠海道东 三围GMP厂房C 栋3楼 申请人 上海迈石生物技 术有限公司 　 深圳创石生物医药有限公司 (72)发明人 陈艺丽　王春河　刘国键　刘鑫园　 谭杰　陈淦均　唐磊　丁华平　 吴委涛　洪一峯　 (74)专利代理 机构 北京金信知识产权代理有限 公司 11225 代理人 李雪芹　徐琳 (51)Int.Cl. C07K 16/46(2006.01)C12N 15/62(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种抗HER2/抗PD-L1双功能抗体及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种抗HER2/抗PD ‑L1双功能抗 体及其应用。 所述抗HER2 /抗PD‑L1双功能抗体包 括： 单克隆抗体单元， 其针对HER2并且包括2个重 链和2个轻链； 单链抗体单元， 其针对PD ‑L1并且 包括2个单链抗体， 所述单链抗体包括重链可变 区和轻链可变区， 所述重链可变区和轻链可变区 通过连接肽连接， 其中， 所述2个单链抗体的N端 或C端分别通过linker与所述单克隆抗体 单元的 2条重链的Fc片段的C端连接。 本发明的抗HER2/ 抗PD‑L1双功能抗体 可以与PD‑L1结合， 同时也能 够与HER2结合， 为 一种新型的抗肿瘤药物。 权利要求书2页 说明书8页 序列表13页 附图8页 CN 113943371 A 2022.01.18 CN 113943371 A 1.一种抗H ER2/抗PD‑L1双功能抗体， 其包括： 单克隆抗体单 元， 其针对H ER2并且包括2个重链和2个轻链； 单链抗体单元， 其针对PD ‑L1并且包括2个单链抗体， 所述单链抗体包括重链可变区和 轻链可变区， 所述重链可变区和轻链可变区通过 连接肽连接； 其中， 所述2个单链抗体的N端或C端分别通过linker与所述单克隆抗体单元的2条重链 的Fc片段的C端连接 。 2.根据权利要求1所述的抗HER2/抗PD ‑L1双功能抗体， 其中， 所述linker的序列如SEQ   ID NO.： 8所示。 3.根据权利要求1所述的抗HER2/抗PD ‑L1双功能抗体， 其 中， 在所述单链抗体中的连接 肽为1‑5个重复的G GGGS的序列， 优选地， 所述连接肽的序列如SEQ  ID NO.： 9所示。 4.根据权利要求1所述的抗HER2/抗PD ‑L1双功能抗体， 其 中， 所述单链抗体的重链可变 区包括氨基酸序列为SEQ  ID NO.： 10的CD R1、 氨基酸序列为SEQ  ID NO.： 11的CDR2、 氨基酸 序列为SEQ  ID NO.： 12的CDR3， 以及所述单链抗体的轻链可变 区包括氨基酸序列为SEQ  ID  NO.： 13的CDR1、 氨基酸序列为SEQ  ID NO.： 14的CDR2、 氨 基酸序列为SEQ  ID NO.： 15的CDR3， 优选地， 所述单链抗体的全长氨基酸序列如SEQ  ID NO.： 3或SEQ  ID NO.： 4所示。 5.根据权利要求1所述的抗HER2/抗PD ‑L1双功能抗体， 其 中， 所述双功能抗体的轻链全 长氨基酸序列如SEQ  ID NO.： 5所示， 以及所述双功能抗体的重链全长氨基酸序列如SEQ  ID  NO.： 6所示。 6.根据权利要求1所述的抗HER2/抗PD ‑L1双功能抗体， 其 中， 所述双功能抗体的轻链全 长氨基酸序列如SEQ  ID NO.： 5所示， 以及所述双功能抗体的重链全长氨基酸序列如SEQ  ID  NO.： 7所示。 7.一种编码如权利要求1至 6中任一项所述的抗H ER2/抗PD‑L1双功能抗体的多 核苷酸。 8.一种表达载体， 其包 含如权利要求7 所述的多 核苷酸。 9.一种如权利 要求1至6中任一项所述的抗HER2/抗PD ‑L1双功能抗体的制备方法， 所述 方法包括以下步骤： 1)鼠源anti ‑PD‑L1抗体的人源化改造 用人抗体基因的Germline基因作为模板采用Framework  shuffling方法将鼠源anti ‑ PD‑L1抗体人源化并优化为scFv的形式， 其中相应的VH和VL构架改组的文库是通过重叠P CR 的全体外合成生成的， 然后构建scFv噬菌体文库的克隆， 筛选和鉴定， 最终得到在VH44和 VL100位置处引入了半胱氨酸残基的抗P D‑L1 scFv； 2)构建、 表达和纯化 抗HER2/抗PD‑L1双功能抗体 曲妥珠单抗轻链和重链的氨基酸序列来自IMGT/mAb ‑DB， 将步骤 1)中得到PD ‑L1 scFvs 通过linker连接肽连接 到曲妥珠 单抗Fc片段的C末端， 在该步骤中， 合成了对应的DNA序列， 并将其亚克隆到pcDNA3.1载体中并在 大肠杆菌中 扩增， 之后通过PEI将纯化的质粒转染到HEK293细胞中， 然后将细胞悬浮在 FreeStyleTM293表达培养基中进行培养后， 收集细胞培养上清液， 并通 过蛋白A柱纯化抗体， 纯化的IgG1用磷酸盐缓冲液透析， 速冻并保存。 10.如权利 要求1至6中任一项所述的抗HER2/抗PD ‑L1双功能抗体在制备预防、 诊断、 治 疗或辅助治疗肿瘤的药物中的应用，权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 113943371 A 2优选地， 所述肿瘤选自肺癌、 胃癌、 肝癌、 结肠直肠癌、 黑色素瘤、 肾瘤、 卵巢癌、 前列腺 癌、 膀胱癌、 乳 腺癌、 食管癌、 大肠癌、 鼻咽癌、 脑肿瘤、 宫颈癌、 血癌、 骨癌、 淋巴癌、 胰脏癌中 的一种或多种。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 113943371 A 3