(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111298435.5 (22)申请日 2021.11.04 (71)申请人 江苏省人民医院 （南京医科 大学第 一附属医院） 地址 210009 江苏省南京市 鼓楼区广州路 300号 (72)发明人 顾艳宏　吴兴新　李晓菲　 (74)专利代理 机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 代理人 唐循文 (51)Int.Cl. C12N 7/01(2006.01) C12N 15/12(2006.01) C12N 15/861(2006.01) A61K 35/761(2015.01)A61K 38/19(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种新型的表达CXCL10的复制型溶瘤腺病 毒和应用 (57)摘要 本发明涉及溶瘤腺病毒 领域， 具体涉及一种 新型的表达CXCL10的复制型溶瘤腺病毒和应用。 一种表达C XCL10的复制型溶瘤腺病毒， 其特征在 于， 含有鼠源的或人源的CXCL10， 其中鼠源的 CXCL10的核苷酸序列为SEQ  ID NO.1， 人源的 CXCL10核苷酸为SEQ  ID NO.2。 本发明中的新型 复制型溶瘤腺病毒Adv ‑CXCL10具有直接杀伤肿 瘤作用， 且能够持续地在瘤内表达CXCL10， 能够 趋化更多的CXCR3+T细胞进入TME， 并且诱导TME 表达更多的IFN ‑γ和Granzyme  B， 同与PD ‑1单抗 联用显著抑制肿瘤增长， 具有出色的抗肿瘤作 用。 权利要求书1页 说明书10页 序列表2页 附图4页 CN 113980915 A 2022.01.28 CN 113980915 A 1.一种表达CXCL10的复制型溶瘤腺病毒， 其特征在于， 含有鼠源的或人源的CXCL10， 其 中鼠源的CXCL10的核苷酸序列为SEQ  ID NO.1， 人源的CXCL10核苷酸 为SEQ ID NO.2。 2.根据权利 要求1所述一种表达CXCL10的复制型溶瘤腺病毒的构建方法， 其特征在于， 装载CXCL10基因的腺病毒穿梭质粒Ad5 ‑pShuttle ‑CMV‑E1A‑EF1a‑CXCL10， 线性化后转染 pAdEasy‑BJ5183， 获得Adv ‑CXCL10全长质粒， Adv ‑CXCL10全长质粒线 性化转染29 3T细胞， 培 养， 离心， 收集上清， 纯化获得表达CXCL10的复制型溶瘤腺病毒， 其中所述的Ad5 ‑pShuttle ‑ CMV‑E1A‑EF1a‑CXCL10核苷酸序列为SEQ  ID NO.3。 3.根据权利要求1所述的一种表达CXCL10的复制型溶瘤腺病毒在制备抗肿瘤药物中的 应用。 4.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于所述的应用为表达CXCL10的复制型溶瘤腺 病毒与其 他免疫治疗联用制备抗肿瘤药物中的应用。 5.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述的肿瘤为结直肠癌、 黑色素瘤、 肝癌、 胃癌、 食管癌、 肺癌、 卵巢癌、 乳腺癌、 脑胶质瘤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113980915 A 2一种新型的表达CXC L10的复制型溶瘤腺病毒和应用 技术领域 [0001]本发明涉及溶瘤腺病毒领域， 具体涉及一种新型的表达CXCL10的复制型溶瘤腺病 毒和应用。 背景技术 [0002]PD‑1是T细胞免疫检查点之一， 能够作为负性调控因子调节T细胞的功能。 尽管抗 PD‑1治疗对肿瘤 治疗产生了重要的影响， 但是它在临床的响应能力仍然有限。 研究表明， 抗 PD‑1治疗的有效率与肿瘤患者的基因微卫星状态、 肿瘤微环 境(TME)中免疫细胞浸润情况、 IFN‑γ信号等等相关。 以晚期结直肠癌(mCRC)为例， 单药PD ‑1治疗仅提高了微卫星高度不 稳定(MSI ‑H)患者的客观缓解率， 但对微卫星稳定(MSS)患者效果甚微。 然而， 大部分的mCRC 患者为MSS型， 这意味着他们可能对PD ‑1单药治疗 无效。 因此寻找能够增加PD ‑1单抗疗效的 联合治疗方法显得 尤为重要。 [0003]以往多项研究均表明， TME中CXCR3及 配体相关信号对于肿瘤预后和PD ‑1疗效响应 有积极作用。 CXCR3是一种表达于细胞毒性淋巴(CTL)、 NK细胞、 NKT细胞、 DC细胞和B细胞等 的趋化因子受体， 可以受其配体CXCL9/10/11趋化， 到达指定部位发挥作用。 血清CXCR3可以 作为一个预测PD ‑1疗效的生物标志物， 而外源性地增加瘤内CXCL9/10浓度， 可以促进TME中 CXCR3+T细胞比例增加， 协同PD ‑1抗体产生更加强的抑制肿瘤生长作用。 此外， 一些其他的 研究也表明， 瘤内CXCL10信号与免疫检查点疗效呈正相关， 其机制在于瘤内CXCL10信号使 得更多的CXCR3+T细胞出现在 TME中， 使肿瘤从免疫细胞浸润较少的 “冷”肿瘤成为了有较多 效应免疫细胞浸润的 “热”肿瘤， 从而增强了PD ‑1抗体的抗肿瘤作用。 以上证据说明了CXCR3 及其配体在免疫检查点治疗中的重要作用， 而瘤内高浓度的趋化因子维持又是其中的重 点。 [0004]然而趋化因子在体内半衰期较短， CXCL10也因为这个原因， 被限制了其作为药物 直接使用的潜力。 因此使CXCL 10等趋化因子能长效地在 TME中表达、 维持高浓度梯度并持续 招募CXCR3+T细胞的策略有 待开发。 [0005]近年来， 溶瘤病毒正作为一种新兴的肿瘤生物治疗药物被广泛地研究， 从机制 上 讲， 溶瘤病毒可以直接裂解肿瘤细胞， 也可以在裂解细胞 的同时使得肿瘤释放肿瘤相关抗 原(TAA)、 病原相关分子模式(PAMPs)信 号、 危险相关分子模式(DAMPs)信 号等， 诱发机体产 生天然免疫和 适应性免疫攻击肿瘤细胞。 更值得一提的是， 溶瘤病毒也可以作为一种 出色 的外源基因载体应用于抗肿瘤治疗， 而趋化因子就是一种常见的被插入病毒中的外源基 因， 因为他们可以用来招募免疫细胞。 例如非常著名的溶瘤病毒T ‑Vec， 就是将粒细胞 ‑巨噬 细胞集落刺激因子(GM ‑CSF)装入了改良后的单 纯疱疹病毒， 在2015年已被FDA批准上市。 [0006]结合以上几点我们设想， 可以构建一种新型的重组溶瘤病毒， 将CXCL10插入其中 通过瘤内注 射实现CXCL10在TME的持续表达以招募更多效应T细胞， 达到更好的肿瘤杀伤作 用和协同抗P D‑1等抗免疫检查 点治疗的抗肿瘤作用。说　明　书 1/10 页 3 CN 113980915 A 3