(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111324996.8 (22)申请日 2021.11.10 (71)申请人 远见生物科技 （上海） 有限公司 地址 201114 上海市闵行区新骏环路245号 第6层E619室 (72)发明人 杜飞　 (74)专利代理 机构 北京品源专利代理有限公司 11332 代理人 赵颖 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 1/16(2006.01) (54)发明名称 一种检测甲胎蛋白基因和PGR13基因表达量 的试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种检测甲胎蛋白基因和 PGR13基因表达量的试剂盒及其应用， 所述试剂 盒包括分别特异性扩增甲胎蛋白基因和PGR13基 因的引物对。 利用mRNA 基因芯片 对肝癌组织及癌 旁组织进行分析， 分析筛选结果显示在肝癌组织 及癌旁组织中所述PGR13基因存在差异表达。 在 本发明中以甲胎蛋白基因和PGR13基因作为肝癌 标志物， 所述甲胎蛋白基因和PGR13基因均在肝 癌组织中显著高表达， 且二者呈正相关， 与单独 以甲胎蛋白基因作为诊断指标相比较， 甲胎蛋白 基因和PGR13基因联合诊断具有更高的灵敏度和 特异性。 权利要求书1页 说明书8页 序列表2页 附图3页 CN 113957149 A 2022.01.21 CN 113957149 A 1.一种检测甲胎蛋白基因和PGR13基因表达量的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括 分别特异性扩增甲胎蛋白基因和PGR 13基因的引物对。 2.根据权利要求1所述的检测甲胎蛋白基因和PGR13基因表达量的试剂盒， 其特征在 于， 所述试剂盒中特异性扩增甲胎蛋白基因的上游引物包括SEQ  ID No.1所示的核苷酸序 列， 特异性扩增甲胎蛋白基因的下游引物包括SEQ  ID No.2所示的核苷酸序列。 3.根据权利要求1或2所述的检测甲胎蛋白基因和PGR13基因表达量的试剂盒， 其特征 在于， 所述试剂盒中特异性扩增PGR13基因的上游引物包括SEQ  ID No.3所示的核苷酸序 列， 特异性扩增PGR 13基因的下游引物包括SEQ  ID No.4所示的核苷酸序列； 优选地， 所述试剂盒还 包括PCR缓冲液、 酶混合液和荧 光染料； 优选地， 所述试剂盒还 包括特异性扩增内参基因的引物对。 4.一种权利要求1～3任一项所述的检测甲胎蛋白基因和PGR13基因表达量的试剂盒以 非疾病诊断和/或治疗为目的 的使用方法， 其特 征在于， 所述使用方法包括： 使用所述分别特异性扩增甲胎蛋白基因和PGR13基因的引物对对待测癌症组织和癌旁 组织进行RT‑qPCR检测， 计算待测癌症组织和癌旁 组织中的甲胎蛋白基因和PGR13基因的相 对表达量， 并进行计算分析。 5.根据权利要求4所述的检测甲胎蛋白基因和PGR13基因表达量的试剂盒以非疾病诊 断和/或治疗为目的使用方法， 其特 征在于， 所述使用方法包括以下步骤： (1)模板制备： 提取待测癌症组织和癌旁组织中的总RNA并逆转录合成cDNA； (2)检测： 利用所述分别特异性扩增甲胎 蛋白基因和PGR13基因的引 物对通过RT ‑qPCR 对所得cDNA进行检测， 以GAPDH基因为内参基因， 根据Ct值计算所述甲胎蛋白基因和PGR13 基因的相对表达量； (3)分析： 根据所述甲胎蛋白基因和PGR13基因的相对表达量， 计算癌症组织和癌旁组 织中甲胎蛋白基因和PGR 13基因的相对表达量的差异倍数， 并进行判断。 6.一种鉴别肝癌的系统， 其特 征在于， 所述 鉴别肝癌的系统包括： 模板制备模块： 提取样本中的总RNA并逆转录合成cDNA； 检测模块： 以所 得cDNA为模板， 进行RT ‑qPCR检测， 并计算相对表达量； 分析模块： 根据相对表达量的差异倍数进行判断。 7.根据权利要求6所述的鉴别肝癌的系统， 其特征在于， 所述样品包括癌症组织和癌旁 组织； 优选地， 所述检测模块检测的基因包括甲胎蛋白基因和PGR 13基因。 8.根据权利要求6或7所述的鉴别肝癌的系统， 其特征在于， 所述根据相对表达量的差 异倍数进行判断的步骤包括： 计算癌症组织和癌旁组织中甲胎蛋白基因和PGR13基因的相 对表达量的差异倍数， 根据差异倍数进行肝癌阳性判断。 9.权利要求1～3任一项所述的检测甲胎蛋白基因和PGR13基因表达量的试剂盒和/或 权利要求6～8任一项所述的鉴别肝癌的系统在制备肝癌治疗和/或诊断的产品中的应用。 10.一种治疗肝癌的药物， 其特征在于， 所述治疗肝癌的药物以甲胎蛋白基因和PGR13 基因为靶点。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113957149 A 2一种检测甲胎蛋白基因和PGR13基因表达量的试剂盒及其 应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药领域， 涉及一种检测甲胎蛋白基因和PGR13基因表达量的试 剂盒及其应用。 背景技术 [0002]原发性肝癌是发病率和死亡率都较高恶性肿瘤之一， 在原发性肝癌中， 肝细胞癌 (Hepatocellular  Carcinoma， HCC)占比较高， 由于缺乏有 效的检测和诊断指标， 多数病人 在确诊时已到中晚期， 错失早期治疗可能。 肝癌的恶性度高， 早期症状不明显， 疾病发展迅 速， 易出现肝内转移和其 他脏器多发转移， 因此肝癌的早期诊断是临床诊疗的关键 。 [0003]目前临床上的肝癌的筛查办法包括B超显像和肿瘤标志物甲胎蛋白(alpha   fetoprotei n， AFP)的血清含量筛查。 [0004]专利CN10 1984919A公开了一种三维超声成像早期检测肝癌病变组织目标的方法， 通过对扫描图象进行处理， 使声象学信息能够以三维方式有效地反 映出来， 其图象的显示 精度部分达到了低倍显微镜的效果， 对诊断各期肝纤维化、 慢性肝炎的炎症分期、 肝硬化和 肝癌的早期诊断等具有重要的应用价值。 但影像学手段对早期 HCC诊断的敏感性偏低， 对于 HCC术后复发的检出存在难度。 [0005]专利CN112098648A公开了一种检测肝癌患者血清生物标志物的方法， 甲胎蛋白与 多种肿瘤的发生和发展密切相关， 临床上主要作为肝癌的血清标志物， 用于原发性肝癌的 诊断和疗效监测。 因此， 甲胎蛋白的高灵敏检测对于肝癌患者的早期诊断与治疗具有重要 意义。 所述检测肝癌患者血清生物标志物的方法， 利用聚多巴胺与空心纳米金构建信号控 释纳米材料， 实现了对AFP简单且高效的检测。 尽管其检测的灵敏度高， 但是它的假阴性率 高达40％， 并且一些非肿瘤性疾病， 如肝炎和肝硬化， 其患者血 液中的AFP也可能会升高。 [0006]因此， 探寻新的可用于肝癌早期诊断的指标， 提高诊断的准确度， 将有助于肝癌的 早发现和早治疗， 对肝癌的治疗和诊断具有重要意 义。 发明内容 [0007]为了克服现有技术的不足， 本发明的目的在于提供一种检测甲胎蛋白基因和 PGR13基因(G  protein‑coupled receptor  13， PGR13， G蛋白偶连受体13)表达量的试剂盒 及其应用， 所述试剂盒包括分别特异性扩增甲胎蛋白基因和PGR13基因的引物对。 利用mRNA 基因芯片对肝癌组织及癌旁组织进行分析， 分析筛选结果表明在肝癌组织及癌旁组织中所 述PGR13基因存在差异表达。 在本发明中以甲胎蛋白基因和PGR13基因作为肝癌标志物， 所 述甲胎蛋白基因和PGR13基因均在肝癌组织中显著高表达， 且二者呈正相关， 与单独以甲胎 蛋白基因作为诊断指标相比较， 甲胎蛋白基因和PGR13基因联合诊断具有更高的灵敏度和 特异性。 [0008]为达到此发明目的， 本发明采用以下技 术方案：说　明　书 1/8 页 3 CN 113957149 A 3