(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111285967.5 (22)申请日 2021.11.01 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113831756 A (43)申请公布日 2021.12.24 (73)专利权人 东南大学 地址 211102 江苏省南京市江宁区东 南大 学路2号 (72)发明人 钱鹰　项雯晖　刘巴蒂　 (74)专利代理 机构 南京苏高专利商标事务所 (普通合伙) 32204 专利代理师 王艳 (51)Int.Cl. C09B 23/14(2006.01) C07D 417/06(2006.01) C09K 11/06(2006.01) A61K 41/00(2020.01) A61K 49/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01)(56)对比文件 CN 110041311 A,2019.07.23 项雯晖 等.吩噻嗪-荧 光蛋白生色团类似物 的合成、 S 原子促进的光动力治 疗及双光子荧 光 成像. 《有机化学》 .2021,第41卷第3 578-3584页. Ermakova, Yul ia G.等.Pyridi nium Analogues of Gre en Fluorescent Protei n Chromophore: Fluorogen ic Dyes w ith Large Solvent-Dependent Sto kes Shift. 《Journal of Physical C hemistry Let ters》 .2018,第9卷 (第8期),第1958-196 3页. Clark, Travis B.等.Synthesis and Optical Properties of Tw o-Photon Absorbing GFP-type Probes. 《Journal of Physical C hemistry C》 .201 1,第115卷(第15 期),第73 31-7338页. Feng, Guangfu 等.DNA mimics of red fluorescent protei ns (RFP) based o n G- quadruplex- confined synthetic RFP chromophores. 《Nucleic Acids Researc h》 .2017,第45卷(第18 期),第10 380-10392页. 审查员 李冰 (54)发明名称 一种红色荧光蛋白类双光子光敏染料及其 制备方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种红色荧光蛋白类双光子 光敏染料RFP‑Ac及其制备方法和应用， 所述红色 荧光蛋白类双光子光敏染料 RFP‑Ac包含吩噻嗪、 乙烯基苯与荧光蛋白亚甲基咪唑啉酮的共轭结 构， 同时在荧光生色团端基引入丙烯 酸芳基酯作 为活性硫醇识别位点和光敏剂 靶向基团。 本发明 的红色荧光蛋白类光敏染料分子RFP ‑Ac具有双 光子吸收特性， 斯托克斯位移超过200  nm， 抗干 扰能力强， 灵敏度高， 细胞毒性小， 生物相容性 好， 单线态氧产率较高， 可作为性能优异的双光 子光敏染料和荧光探针， 在近红外波段荧光传感、 内源性或外源性生物活性硫醇检测、 双光子 荧光成像、 荧光标记、 双光子光动力治疗方面具 有广泛应用。 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 CN 113831756 B 2022.07.08 CN 113831756 B 1.一种红色荧 光蛋白类双光子光敏染料RFP ‑Ac， 其特征在于， 包括如下 结构式： 2.根据权利 要求1所述的一种红色荧光蛋白类双光子光敏染料RFP ‑Ac， 其特征在于， 所 述光敏染料RFP ‑Ac通过吩噻嗪荧光蛋白类似物RFP ‑Me依次与对羟基苯甲醛和丙烯酰氯反 应制备而成， 所述RFP ‑Me结构式如下： 3.权利要求1或2所述的一种红色荧光蛋白类双光子光敏染料RFP ‑Ac的制备方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 将吩噻嗪荧光蛋白类似物RFP ‑Me在惰性气体保护和110℃下与对 羟 基苯甲醛在无水 甲苯中反应后再在室温下与丙烯酰氯反应， 柱色谱提纯， 得到所述的红色 荧光蛋白类双光子光敏染料RFP ‑Ac。 4.根据权利要求3所述的一种红色荧光蛋白类双光子光敏染料RFP ‑Ac的制备方法， 其 特征在于， 所述吩噻嗪荧 光蛋白类似物RFP ‑Me与对羟基苯甲醛的摩尔比为1∶ 1.2 ～1∶2.0。 5.权利要求1或2所述的一种红色荧光蛋白类双光子光敏染料在近红外波段荧光探针、 双光子荧 光成像、 荧 光传感或荧光标记中的应用。 6.权利要求1或2所述的一种红色荧光蛋白类双光子光敏染料在制备作为近红外双光 子光动力治疗光敏剂药物中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述药物为用于对肿瘤细胞进行光动力治 疗的药物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113831756 B 2一种红色荧光蛋白类双光子光敏染料及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及 一种荧光蛋白类光敏染料， 具体涉及 一种红色荧光蛋白类双光子光敏 染料RFP‑Ac及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]在光激发下， 光敏染料通过光控能量转移在肿瘤部位产生单线态氧。 单线态氧对 肿瘤细胞具有高毒性， 能与肿瘤细胞中的DNA、 RNA、 脂质和蛋白质分子 反应， 导致细胞凋亡， 实现对肿瘤细胞的光动力治疗。 半胱氨酸和谷胱甘肽是细胞中最具代表性的活性硫醇， 它 们在肿瘤细胞中的浓度高于正常细胞。 半胱氨酸和谷胱甘肽的过度表达会消耗细胞内的活 性氧， 降低光动力治疗效果。 [0003]目前绝大多数用于光动力治疗的光敏染料位于可见光区域， 生物相容性差， 且缺 少靶向基团， 难以满足生物体系光动力治疗的要求， 极大地限制了其应用范围。 近红外双光 子光敏染料可以有效减少光损伤， 在生物组织中穿透力强， 安全可靠； 硫醇靶向基团有利于 消耗肿瘤细胞内过度表达的活性硫醇半胱氨酸和谷胱甘肽， 从而增强光动力治疗效果。 因 此， 设计制备性能优异、 具有靶向基团的近红外双光子光敏染料 是近期的研究热点。 [0004]荧光蛋白是一种从水母中发现的生物发光大分子， 其发光母核结构是亚甲基咪唑 啉酮。 由于是生物体内的荧光团， 荧光蛋白具有优异的生物相容性， 毒性低， 斯托克斯位移 大， 受到生物体自身的背 景干扰小， 安全可靠， 但在现有技术中基于红色荧光蛋白结构的近 红外双光子光敏染料鲜有报道。 发明内容 [0005]发明目的： 本 发明的第一个目的是提供一种性能优异、 斯托克斯位移大、 抗背景干 扰能力强、 生物相容 性好的红色荧 光蛋白类双光子光敏染料RFP ‑Ac。 [0006]本发明的第二个目的是提供上述红色荧光蛋白类双光子光敏染料RFP ‑Ac的制备 方法。 [0007]本发明的第三个目的是提供了上述红色荧光蛋白类双光子光敏染料RFP ‑Ac在近 红外波段荧 光探针、 双光子荧 光成像、 荧 光传感或荧光标记中的应用。 [0008]本发明的第四个目的是提供上述红色荧光蛋白类双光子光敏染料RFP ‑Ac在作为 近红外双光子光动力治疗光敏剂中的应用。 [0009]技术方案： 为了解决上述技术问题， 本发明提供了一种红色荧光蛋白类双光子光 敏染料RFP ‑Ac， 包括如下 结构式：说　明　书 1/5 页 3 CN 113831756 B 3