DB1307 张 家 口 市 地 方 标 准 D B 1 3 0 7 /T3 9 4 —2 0 2 2I C S 6 5 . 0 2 0 . 3 0 C C S B4 3 母 驴 人 工 授 精 技 术 规 程 2 0 2 2 - 1 0 -2 7 发 布2 0 2 2 - 1 1 -2 7 实 施 张家口市市场监督管理局发 布 D B 1 3 0 7 / T 3 9 4 —2 0 2 2 I前言 本 文 件 按 照 G B / T 1 . 1 —2 0 2 0 《标 准 化 工 作 导 则 第1部 分 ：标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 》的 规 定 起 草 。 本 文 件 由 张 家 口 市 农 业 农 村 局 提 出 并 归 口 。 本 文 件 起 草 单 位 ：阳 原 县 农 业 农 村 局 、中 国 农 业 大 学 、张 家 口 桑 阳 牧 业 有 限 公 司 、张 家 口 市 农 产 品 质 量 安 全 监 督 检 验 中 心 。 本 文 件 主 要 起 草 人 ： 曾 申 明 、 庞 洁 、 沈 学 梅 、 王 海 丽 、 韩 海 军 、 武 开 、 白 海 宾 、 闫 冬 梅 、 肖 江 龙 、 贾 建 平 、 祁 建 平 、 李 靖 、 李 楠 、 王 佳 敏 。 D B 1 3 0 7 / T 3 9 4 —2 0 2 2 1母驴 人 工 授 精 技 术 规 程 1范 围 本 文 件 规 定 了 母驴 人 工 授 精 的 发 情 鉴 定 、精 液 准 备 、输 精 、妊 娠 鉴 定 、数 据 记 录 和 废 弃 物 无 害 化 处 理操 作 技 术 要 求 。 本 文 件 适 用 于 张 家 口 地 区 内母驴的 人 工 授 精 操 作 。 2规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款 。其 中 ，注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件 ；不 注 日 期 的 引 用 文 件 ，其 最 新 版 本 （包 括 所 有 的 修 改 单 ）适 用 于 本 文 件 。 G B / T 3 9 1 7 1 —2 0 2 0 废 塑 料 回 收 技 术 规 范 3术 语 与 定 义 下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件 。 3 . 1 h C G 指 人 绒 毛 膜 促 性 腺 激 素 。 3 . 2 G n R H 指 促 性 腺 激 素 释 放 激 素 。 3 . 3 C A S A 指 计 算 机 辅 助 精 液 分 析 系 统 。 4发 情 鉴 定 4. 1 试 情 法 挑 选 体 质 健 壮 、性 欲 旺 盛 的 种 公 驴 进 行 试 情 。牵 拉 种 公 驴 在 母 驴 圈 舍 外 部 通 道 走 动 ，或 者 拴 系 在 母 驴 圈 内 的 柱 桩 上 。处 于 发 情 期 的 母 驴 表 现 出 愿 意 接 近 公 驴 ，并 有 弓 腰 举 尾 、阴 唇 闪 合 、频 繁 排 尿 、后 肢 张 开 、两 耳 向 颈 部 收 拢 、口 部 频 繁 开 合 等 行 为 ；未 发 情 母 驴 则 躲 避 公 驴 ，甚 至 在 公 驴 靠 近 时 ，有 蹴 踢 和 啃 咬 等 抗 拒 行 为 。 4. 2 B超 直 肠 发 情 鉴 定 D B 1 3 0 7 / T 3 9 4 —2 0 2 2 24 . 2 . 1 所 需 设 备 及 试 剂 B型 超 声 波 诊 断 仪 、 一 次 性 长 臂 手 套 、 润 滑 剂 、 促 排 卵 药 物 、 注 射 器 。 4 . 2 . 2 母 驴 的 发 情 鉴 定 将 待 检 母 驴 用 保 定 栏 固 定 后 ，检 查 者 在 操 作 前 修 剪 并 磨 平 指 甲 ，清 洗 消 毒 手 臂 ，戴 上 一 次 性 长 臂 手 套 并 抹 上 润 滑 剂 ，在 母 驴 后 方 将 手 握 成 锥 形 缓 慢 插 入 肛 门 。若 直 肠 内 有 粪 便 可 用 手 清 除 ，待 直 肠 内 部 干 净 且 直 肠 壁 舒 缓 时 ，将 手 臂 深 入 触 摸 卵 巢 。然 后 ，将B型 超 声 波 诊 断 仪 探 头 握 在 手 心 ，平 行 并 紧 贴 直 肠 壁 下 缘 ，依 次 检 查 母 驴 子 宫 体 、子 宫 角 和 卵 巢 卵 泡 发 育 状 态 。卵 泡 发 育 形 态 参 照 附 录 B . 1 。母 驴 发 情 阶 段 一 般 分 为 以 下 四 个 阶 段 ： a ) 间 情 期 ： 卵 泡 上 有 多 个 小 卵 泡 、 直 径 为 1 0 m m ～2 0 m m ； 子 宫 角 和 子 宫 体 回 声 均 匀 ， 没 有 液 体 存 留 ； 此 阶 段 母 驴 阴 道 干 涩 ， 不 接 受 爬 跨 ， 抗 拒 直 肠 检 查 ； b ) 发 情 前 期 ： 卵 巢 上 出 现 优 势 卵 泡 ， 体 积 增 加 较 快 ， 卵 泡 内 充 满 液 体 ， 卵 泡 直 径 一 般 为 2 0 m m ～3 0 m m ；子 宫 角 出 现 水 肿 ，阴 道 有 少 量 稀 薄 粘 液 流 出 ；部 分 母 驴 出 现 发 情 行 为 ，表 现 为 接 近 公 驴 ，少 部 分 出 现 口 部 反 复 开 合 、 两 耳 向 颈 部 收 拢 ； c ) 发 情 期 ：优 势 卵 泡 快 速 生 长 ，直 径 达 到 3 0 m m 以 上 ，此 时 母 驴 出 现 明 显 的 发 情 行 为 ，主 动 接 近 公 驴 、 接 受 爬 跨 、 频 繁 排 尿 ， 口 部 反 复 开 合 、 两 耳 向 颈 部 收 拢 ； 子 宫 角 水 肿 明 显 ； d ) 发 情 后 期 ： 卵 泡 破 裂 排 卵 ， 检 查 时 可 见 明 显 黄 体 ， 母 驴 性 情 逐 渐 安 静 ； 子 宫 角 水 肿 消 失 。 4 . 2 . 3 发 情 母 驴 的 处 理 诊 断 结 束 后 ，准 确 记 录 母 驴 的 卵 泡 、子 宫 和 黄 体 状 态 ，在 母 驴 后 背 标 记 卵 泡 发 育 情 况 ，挑 选 出 优 势 卵 泡 直 径 在 3 0 m m 以 上 的 母 驴 ， 注 射 l . 0 mL的G n R H 类 似 物 或 2 0 0 0 I U h C G ， 优 势 卵 泡 直 径 在 3 5 mm 的 母 驴 在 当 天 下 午 输 精 ， 而 优 势 卵 泡 直 径 在 3 0 m m ～3 5 m m 的 母 驴 在 第 二 天 下 午 进 行 输 精 。 5精 液 准 备 5. 1 所 需 设 备 及 试 剂 一 次 性 长 臂 手 套 、 显 微 镜 、 CA S A 系 统 、 量 筒 、 温 度 计 、 恒 温 水 浴 锅 、 假 阴 道 、 集 精 杯 、 稀 释 液 、 润 滑 剂 、 高 压 蒸 汽 灭 菌 锅 、 精 液 分 装 瓶 、 烧 杯 、 毛 巾 、 温 水 、 消 毒 液 、 酒 精 、 纱 布 、 2 0 mL注 射 器 、 载 玻 片 、 盖 玻 片 。 5. 2 采 精 前 准 备 5. 2 . 1 稀 释 液 的 准 备 在 发 情 鉴 定 当 天 ，按 照 发 情 母 驴 的 数 量 准 备 稀 释 液 ，力 求 新 鲜 ，稀 释 液 配 好 后 要 进 行 灭 菌 ，然 后 在 4℃保 存 。 在 采 精 前 半 小 时 ， 将 稀 释 液 置 于 3 7 ℃水 浴 锅 中 预 热 待 用 。 5. 2 . 2 采 精 器 具 的 准 备 采 精 所 用 的 器 具 及 相 关 用 品 ，提 前 清 洗 消 毒 ，安 装 假 阴 道 时 ，将 内 胎 两 头 翻 转 套 在 外 壳 的 两 端 ，并 用 橡 胶 圈 加 以 固 定 ， 然 后 用 7 0 % 酒 精 对 内 部 进 行 消 毒 ， 放 入 3 5 ℃恒 温 箱 中 备 用 。 5. 2 . 3 发 情 母 驴 的 准 备 挑 选 发 情 母 驴 ，要 求 性 情 温 顺 ，将 母 驴 牵 到 采 精 大 厅 拴 系 在 栏 柱 上 ，用 清 水 冲 洗 母 驴 臀 部 和 外 阴 部 ， 可 收 集 发 情 母 驴 尿 液 以 刺 激 公 驴 性 欲 。 D B 1 3 0 7 / T 3 9 4 —2 0 2 2 35. 3 精 液 采 集 5. 3 . 1 假 阴 道 的 准 备 预 先 向 安 装 好 的 假 阴 道 夹 层 中 灌 入 4 0 ℃～4 2 ℃热 水 ， 灌 注 量 以 假 阴 道 夹 层 体 积 的 2 / 3 为 宜 ， 到 采 精 时 假 阴 道 内 温 度 为 3 8 ℃左 右 。 假 阴 道 内 腔 压 力 主 要 靠 充 气 来 调 节 ， 可 根 据 采 精 公 驴 阴 茎 大 小 进 行 调 整 ， 假 阴 道 在 灌 水 充 气 后 ， 内 胎 呈 “Y”型 ， 入 口 为 较 浅 的 漏 斗 状 为 宜 。 采 精 前 将 润 滑 剂 均 匀 涂 抹 在 假 阴 道 入 口 至 内 胎 1 / 3 深 处 ， 或 者 在 采 精 前 用 精 液 稀 释 液 冲 洗 。 假 阴 道 结 构 ，参 见 附 录 B . 2 。 5. 3 . 2 公 驴 外 生 殖 器 的 清 洗 待 公 驴 阴 茎 勃